| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| ·引言 | 第11-12页 |
| ·西司它丁钠及其绿色合成 | 第12-14页 |
| ·西司它丁钠的生物合成研究进展 | 第14-18页 |
| ·酰胺酶及其催化机理研究进展 | 第18-21页 |
| ·论文的立题依据和主要研究内容 | 第21-23页 |
| 第二章 D. tsuruhatensis R-酰胺酶的制备 | 第23-37页 |
| ·引言 | 第23-24页 |
| ·材料与方法 | 第24-26页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·D. tsuruhatensis R-酰胺酶诱导实验 | 第24-25页 |
| ·D. tsuruhatensis 氮离子注入诱变 | 第25页 |
| ·D. tsuruhatensis 5 L 罐发酵 | 第25页 |
| ·D. tsuruhatensis R-酰胺酶基因PCR 扩增与测序 | 第25页 |
| ·D. tsuruhatensis R-酰胺酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第25页 |
| ·E. coli BL21(DE3)/pET-dam 5 L 罐发酵 | 第25-26页 |
| ·实验结果 | 第26-34页 |
| ·诱导剂对D. tsuruhatensis R-酰胺酶酶活性的影响 | 第26-27页 |
| ·D. tsuruhatensis CCTCC M 205114 菌株5 L 罐发酵过程 | 第27-28页 |
| ·N 离子注入和自然分离筛选对D. tsuruhatensis 产R-酰胺酶的影响 | 第28-29页 |
| ·D. tsuruhatensis R-酰胺酶基因克隆及表达 | 第29-33页 |
| ·R-酰胺酶基因工程菌5 L 罐发酵 | 第33-34页 |
| ·三个R-酰胺酶菌种发酵比较 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-37页 |
| 第三章 D. tsuruhatensis R-酰胺酶序列与结构分析 | 第37-49页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·材料与方法 | 第37-38页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·重组D. tsuruhatensis R-酰胺酶序列分析 | 第37页 |
| ·重组D. tsuruhatensis R-酰胺酶蛋白结构分析 | 第37-38页 |
| ·实验结果与讨论 | 第38-49页 |
| ·重组D. tsuruhatensis R-酰胺酶基因及氨基酸序列分析 | 第38页 |
| ·重组D. tsuruhatensis R-酰胺酶同源性分析 | 第38-39页 |
| ·重组D. tsuruhatensis R-酰胺酶序列CDD 分析 | 第39-41页 |
| ·重组D. tsuruhatensis R-酰胺酶三级结构预测 | 第41-44页 |
| ·重组D. tsuruhatensis R-酰胺酶手性选择性初探 | 第44-47页 |
| ·重组D.tsuruhatensis R-酰胺酶结构模型评估 | 第47-49页 |
| 第四章 R-酰胺酶酶学性质研究 | 第49-65页 |
| ·引言 | 第49-50页 |
| ·材料和方法 | 第50-53页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·实验仪器 | 第51页 |
| ·化学试剂 | 第51页 |
| ·HPLC 测定方法及验证 | 第51-52页 |
| ·酰胺酶酶活测定 | 第52页 |
| ·重组R-酰胺酶粗酶液提取 | 第52页 |
| ·pH 及缓冲液对重组R-酰胺酶酶活的影响 | 第52页 |
| ·反应温度对重组R-酰胺酶酶活的影响 | 第52页 |
| ·重组R-酰胺酶的稳定性 | 第52-53页 |
| ·重组R-酰胺酶Km 值测定 | 第53页 |
| ·实验结果 | 第53-61页 |
| ·HPLC 检测方法及验证 | 第53-54页 |
| ·R-酰胺酶酶活测定 | 第54-55页 |
| ·pH 及缓冲液对重组R-酰胺酶酶活的影响 | 第55页 |
| ·温度对重组R-酰胺酶酶活的影响 | 第55-56页 |
| ·重组R-酰胺酶的稳定性 | 第56-57页 |
| ·重组R-酰胺酶Km 值测定 | 第57-61页 |
| ·Km 值与酶的应用效率关系研究 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-65页 |
| 第五章 重组D. tsuruhatensis R-酰胺酶的工业化应用 | 第65-73页 |
| ·引言 | 第65-66页 |
| ·材料和方法 | 第66-67页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·实验仪器 | 第66页 |
| ·化学试剂及培养基 | 第66页 |
| ·重组R-酰胺酶菌体固定化 | 第66页 |
| ·重组R-酰胺酶粗酶固定化 | 第66-67页 |
| ·重组R-酰胺酶用于拆分反应及产物提取研究 | 第67页 |
| ·工艺放大及产品质量 | 第67页 |
| ·实验结果 | 第67-71页 |
| ·R-酰胺酶基因工程菌体固定化 | 第67-68页 |
| ·R-酰胺酶粗酶液的固定化 | 第68页 |
| ·R-酰胺酶用于拆分反应及产物提取研究 | 第68-69页 |
| ·工艺放大及产品质量 | 第69-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 第六章 结论与展望 | 第73-81页 |
| ·研究结论 | 第73-75页 |
| ·基因工程技术可有效提高R-酰胺酶的制备效率 | 第73页 |
| ·D. tsuruhatensis R-酰胺酶是一个Amidase Signature | 第73-74页 |
| ·HPLC 方法更适合于DMCPCA、DMCPCS 及酶活的检测 | 第74页 |
| ·固定化重组R-酰胺酶壳聚糖可用于R/S-DMCPCA 的拆分 | 第74页 |
| ·重组R-酰胺酶可用于高光学纯度S-DMCPCA 的工业化生产 | 第74-75页 |
| ·S-DMCPCA 酶工程工艺展望 | 第75-78页 |
| ·酶工程工艺开发过程总结及展望 | 第78-81页 |
| 创新点 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 附录Ⅰ： R-酰胺酶基因Genbank 号 | 第93-94页 |
| 附录Ⅱ： R-酰胺酶基因序列比对 | 第94-98页 |
| 附录Ⅲ： R-酰胺酶氨基酸序列比对 | 第98-100页 |
| 附录Ⅳ： R-酰胺酶进化树 | 第100-101页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的相关论文 | 第101页 |
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