摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-11页 |
文献综述 | 第11-25页 |
第一章 FoxO 家族概述 | 第11-16页 |
·FoxO 转录因子的结构与基因表达 | 第11-12页 |
·Fox 的命名与分类 | 第11-12页 |
·FoxO 的结构特点及FoxO 的染色体定位 | 第12页 |
·FoxO 1 转录活性的调节 | 第12-13页 |
·FoxO 1 的生物学功能 | 第13-16页 |
·FoxO1 与成肌细胞分化关系 | 第14页 |
·FoxO1 在肌纤维类型转化中的作用 | 第14-16页 |
第二章 骨骼肌纤维类型的转化 | 第16-25页 |
·肌纤维的起源 | 第16页 |
·肌纤维的组成结构 | 第16-17页 |
·肌纤维生长发育的基本原理 | 第17-18页 |
·肌管形成的转录控制 | 第18页 |
·肌纤维类型 | 第18-20页 |
·肌纤维的分类 | 第18-19页 |
·成肌细胞分化的基本过程 | 第19-20页 |
·成肌表型分化 | 第20页 |
·影响肌纤维类型分布的关键基因 | 第20-22页 |
·生肌调节因子 | 第21页 |
·生肌蛋白 | 第21页 |
·肌肉生长抑制素 | 第21-22页 |
·过氧化物增殖体激活物受体γ协同激活物 | 第22页 |
·肌细胞增强子-2 | 第22页 |
·肌纤维类型的转化 | 第22-25页 |
·肌纤维类型转换的调控机理 | 第22-23页 |
·FoxO1 对肌纤维类型转换的作用 | 第23页 |
·研究肌纤维类型转换的意义 | 第23-25页 |
试验研究 | 第25-59页 |
第三章 肌纤维类型分化相关基因的组织表达差异 | 第25-37页 |
·材料与方法 | 第25-32页 |
·实验动物 | 第25页 |
·试剂和仪器 | 第25页 |
·总RNA 提取 | 第25-26页 |
·除去RNA 中的基因组DNA | 第26页 |
·反转录 | 第26-27页 |
·PCR 反应 | 第27-29页 |
·蛋白的提取及Western blot 检测 | 第29-32页 |
·结果与分析 | 第32-35页 |
·猪的四种骨骼肌组织中总RNA 的提取 | 第32页 |
·猪四种骨骼肌组织中总RNA 和总蛋白的定量结果 | 第32-33页 |
·反应循环次数的确定 | 第33页 |
·各基因在猪四种骨骼肌组织中的表达 | 第33-35页 |
·FoxO1 蛋白在猪骨骼肌组织中的表达 | 第35页 |
·讨论 | 第35-37页 |
第四章 FoxO1 及肌纤维类型相关基因在成肌细胞分化过程中的表达变化 | 第37-46页 |
·材料与方法 | 第37-40页 |
·材料 | 第37-38页 |
·试验方法 | 第38-40页 |
·结果 | 第40-44页 |
·原代培养成肌细胞的形态学观察 | 第40页 |
·原代培养猪成肌细胞生长曲线绘制 | 第40-41页 |
·含2%血清的分化培养基处理成肌细胞后的形态学观察 | 第41-42页 |
·猪骨骼肌成肌细胞分化时相关基因的表达变化 | 第42-44页 |
·讨论 | 第44-46页 |
第五章 FoxO1 去磷酸化对猪成肌细胞分化为不同类型肌纤维的影响 | 第46-50页 |
·材料与方法 | 第46-47页 |
·实验材料 | 第46页 |
·实验方法 | 第46-47页 |
·结果与分析 | 第47-48页 |
·Wortmannin 对骨骼肌成肌细胞中FoxO1 表达的影响 | 第47页 |
·Wortmannin 对骨骼肌成肌细胞中MyHCs 表达的影响 | 第47-48页 |
·Wortmannin 对骨骼肌成肌细胞中NFAT 和Mef2c 表达的影响 | 第48页 |
·讨论 | 第48-50页 |
第六章 猪FoxO1 基因RNAi 慢病毒载体的构建 | 第50-59页 |
·材料与方法 | 第50-51页 |
·主要试剂与细胞系 | 第50-51页 |
·主要溶液的配制 | 第51页 |
·猪FoxO1 SHRNA 慢病毒载体的构建 | 第51-54页 |
·猪FoxO1 siRNA 引物设计 | 第51-52页 |
·复性(退火)引物合成双链DNA(shRNA) | 第52页 |
·线性化载体 | 第52页 |
·载体酶切产物的回收 | 第52-53页 |
·连接 | 第53页 |
·重组质粒的转化、提取和检测 | 第53-54页 |
·结果 | 第54-58页 |
·单链寡核苷酸退火产物电泳分析 | 第54-55页 |
·空载体质粒检测 | 第55页 |
·酶切产物检测 | 第55页 |
·阳性克隆的测序鉴定 | 第55-58页 |
·讨论 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-66页 |
致谢 | 第66-67页 |
作者简介 | 第67页 |