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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--热处理结合化学处理脱除梨病毒研究及热处理植株中病毒siRNAs鉴定
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热处理结合化学处理脱除梨病毒研究及热处理植株中病毒siRNAs鉴定
 
     论文目录
 
摘要第1-10页
ABSTRACT第10-13页
缩略词表第13-16页
第一章 前言第16-34页
 1 梨的主要病毒及其危害特点第16-19页
   ·苹果花叶病毒(ApMV)第16-17页
   ·苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)第17-18页
   ·苹果茎沟病毒(ASGV)第18页
   ·苹果茎痘病毒(ASPV)第18-19页
 2 ASGV的分子特性第19-21页
   ·ASGV的基因组结构第19-20页
   ·ASGV的分子变异第20-21页
 3 植物病毒脱除技术途径第21-28页
   ·热处理脱除病毒方法第22-23页
   ·茎尖培养脱除病毒方法第23-24页
   ·化学处理脱除病毒方法第24-26页
   ·热处理结合化学处理脱除病毒方法第26页
   ·病毒脱除方法在梨上的应用第26-28页
 4 温度对siRNA积累的影响第28-33页
   ·siRNA的特点第28-30页
   ·热处理脱除病毒机理第30-31页
   ·温度对病毒vsiRNA特性的影响第31-33页
 5 研究目的和意义第33-34页
第二章 梨离体植株继代培养对ASGV群体结构的影响第34-47页
 1 研究材料第34-35页
   ·供试植物材料第34页
   ·主要试剂第34-35页
 2 研究方法第35-39页
   ·样品的收集第35页
     ·茎尖的分离培养第35页
     ·离体植株样品的收集第35页
   ·目标片段的克隆与SSCP分析第35-39页
     ·总RNA的提取第35-36页
     ·cDNA的合成第36页
     ·PCR扩增第36页
     ·目标片段的回收第36-37页
     ·连接第37页
     ·热激转化大肠杆菌DH5α感受态细胞第37-38页
     ·阳性克隆筛选第38页
     ·PCR扩增中rTap DNA聚合酶错配率的计算第38页
     ·SSCP第38-39页
 3 结果与分析第39-45页
   ·梨活体植株中ASGV组成的SSCP分析结果第39-40页
   ·继代培养中离体植株的病毒检测第40页
   ·继代培养中病毒群体的分布特性第40-43页
   ·继代培养植株中ASGV变异观察第43-45页
 4 讨论第45-47页
第三章 ASGV砂梨分离物全基因组序列测定第47-63页
 1 研究材料第47-50页
   ·供试植物材料第47页
   ·主要试剂第47页
   ·所用引物第47-50页
 2 研究方法第50-56页
   ·总RNA的提取第50页
   ·cDNA的合成第50页
   ·PCR扩增第50页
   ·3’RACE第50-51页
     ·反转录第50页
     ·巢式PCR扩增第50-51页
   ·5’RACE第51-55页
     ·去磷酸化处理第51-52页
     ·“去帽子”第52-53页
     ·5’RACE Adaptor的连接第53-54页
     ·反转录第54页
     ·巢式PCR扩增第54-55页
   ·目标片段的克隆第55-56页
     ·目标片段的回收与纯化第55页
     ·连接第55页
     ·热激转化大肠杆菌DH5α感受态细胞第55页
     ·阳性克隆的筛选第55-56页
 3 结果与分析第56-61页
   ·ASGV基因组结构第56-57页
   ·ASGV全基因组及各阅读框的序列特点第57-61页
 4 讨论第61-63页
第四章 热处理与化学处理结合脱除梨病毒的研究第63-77页
 1 研究材料第63页
   ·待处理材料第63页
   ·基本培养基配方第63页
   ·主要试剂第63页
 2 研究方法第63-66页
   ·供试培养基的配制第63-64页
     ·病毒醚母液的配置第63-64页
     ·MS培养基的配置第64页
     ·含病毒醚的MS培养基的配置第64页
   ·离体植株的继代培养第64页
   ·脱毒处理方法第64-65页
     ·化学处理第64页
     ·热处理第64-65页
     ·热处理结合化学处理第65页
     ·对照的设置第65页
     ·培养条件及数据的记录第65页
   ·病毒检测第65-66页
     ·总RNA的提取第65页
     ·cDNA的合成第65-66页
     ·PCR扩增第66页
 3 结果与分析第66-75页
   ·不同处理对梨离体植株生长表型的影响第66-68页
   ·不同处理对梨离体植株株高和增殖的影响第68-70页
   ·不同处理的脱毒效果第70-75页
 4 讨论第75-77页
第五章 热处理植株中ASGV产生的小分子RNAS鉴定第77-93页
 1 研究材料第77-78页
   ·供试植物材料第77页
   ·主要试剂第77-78页
   ·所用引物第78页
 2 研究方法第78-82页
   ·总RNA的提取第78-79页
   ·Dnase的消化第79页
   ·RT-PCR扩增第79-80页
   ·Real-Time RT-PCR扩增第80-81页
     ·病毒产生的siRNA的Real-Time RT-PCR扩增第80-81页
     ·病毒的Real-Time RT-PCR扩增第81页
   ·离体植株材料的获得第81-82页
     ·离体植株的培养第81页
     ·材料的收集第81-82页
   ·离体植株的热处理第82页
   ·热处理材料中siRNA的高通量测序第82页
 3 结果与分析第82-90页
   ·离体植株不同部位的病毒含量第82-83页
   ·热处理不同时期病毒含量的变化第83页
   ·测序样品的总RNA质量检测第83-85页
     ·总RNA的琼脂糖凝胶电泳分析第83-84页
     ·样品总RNA的Agilent 2100检测第84-85页
   ·热处理样品中ASGV产生的siRNA的特性第85-88页
     ·vsiRNA的数量第85页
     ·vsiRNA的片段大小及偏向性第85-86页
     ·vsiRNA出现的频率及在基因组上的分布第86-88页
   ·热处理不同时期ASGV与其siRNA的含量变化第88-90页
     ·热处理不同时期离体材料中ASGV的含量变化第88页
     ·热处理不同时期ASGV产生的siRNA的含量变化第88-90页
 4 讨论第90-93页
参考文献第93-111页
附录A 常用溶液配方第111-113页
附录B ASGV-HH全基因组序列第113-117页
附录C 研究生期间发表文章第117-118页
致谢第118-119页

 
 
论文编号BS12409,这篇论文共119
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