中文摘要 | 第1-13页 |
英文摘要 | 第13-16页 |
第一章 文献综述 | 第16-32页 |
1. 甘蔗花叶病的发生危害与基因工程育种 | 第16-18页 |
·甘蔗花叶病的发生危害 | 第16页 |
·马铃薯Y病毒属侵染植物的细胞病理特征 | 第16-17页 |
·植物病毒侵染对光合作用的影响 | 第17页 |
·甘蔗抗花叶病毒基因工程育种 | 第17-18页 |
2. 植物抗病的生理生化基础 | 第18-22页 |
·活性氧在植物抗病的作用 | 第19-21页 |
·苯丙烷代谢与植物抗病的关系 | 第21-22页 |
3. 植物抗病的分子基础 | 第22-25页 |
·cDNA microarray在植物与病原互作研究中的应用 | 第22-24页 |
·差异蛋白质组学在植物与病原互作研究中的应用 | 第24-25页 |
4. 转基因植物的安全性 | 第25-30页 |
·转基因作物的安全性问题 | 第25-26页 |
·转基因植物中外源基因的漂移 | 第26页 |
·转基因植物对生物多样性的影响 | 第26-27页 |
·转基因植物抗性丧失 | 第27页 |
·抗病毒转基因植物的风险 | 第27-28页 |
·转基因作物对土壤微生态环境的影响 | 第28-29页 |
·标记基因的安全性问题 | 第29页 |
·展望 | 第29-30页 |
5. 本研究的目的、意义及主要研究内容 | 第30-32页 |
·目的及意义 | 第30页 |
·主要研究内容及技术路线 | 第30-32页 |
第二章 转ScMV-CP基因甘蔗抗病稳定性及工农艺性状表现 | 第32-41页 |
1 材料与方法 | 第32-34页 |
·供试材料 | 第32-33页 |
·方法 | 第33-34页 |
·转基因材料种植 | 第33页 |
·花叶病发病率调查 | 第33页 |
·甘蔗基因组 DNA提取 | 第33页 |
·转基因甘蔗ScMV-CP基因的PCR检测 | 第33页 |
·甘蔗农艺性状调查 | 第33-34页 |
2 结果与分析 | 第34-40页 |
·转基因甘蔗的抗病稳定性 | 第34-35页 |
·第三代转基因甘蔗的农艺性状表现 | 第35-36页 |
·第四代转基因甘蔗环境释放的工农艺性状表现 | 第36-39页 |
·转基因甘蔗与非转基因生长速度比较 | 第37页 |
·第四代转基因甘蔗在福建的农艺性状表现 | 第37-38页 |
·第四代转基因甘蔗在福建的品质性状表现 | 第38-39页 |
·第四代转基因甘蔗在浙江的工农艺性状表现 | 第39页 |
·转基因无性系的综合评价 | 第39-40页 |
3 讨论 | 第40-41页 |
第三章 转 ScMV-CP基因甘蔗增产的光合基础 | 第41-54页 |
1 材料与方法 | 第41-44页 |
·材料 | 第41页 |
·方法 | 第41-44页 |
·甘蔗叶片病毒间接ELISA鉴定 | 第41页 |
·超薄切片制备及电镜观察 | 第41-42页 |
·叶片叶绿体全蛋白双向电泳及质谱分析 | 第42-44页 |
·叶绿体全蛋白的提取 | 第42页 |
·蛋白裂解 | 第42页 |
·蛋白质含量测定 | 第42页 |
·第一向等电聚焦 | 第42页 |
·第二向SDS-PEGE | 第42-43页 |
·染色 | 第43页 |
·差异蛋白点的质谱分析 | 第43-44页 |
·光合参数测定 | 第44页 |
·叶绿素含量测定 | 第44页 |
·PEPC酶活性测定 | 第44页 |
·叶片Mg~(2+)-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活性测定 | 第44页 |
·蛋白质含量测定 | 第44页 |
·数据整理与分析 | 第44页 |
2. 结果与分析 | 第44-50页 |
·转ScMV-CP基因甘蔗和非转基因甘蔗叶片细胞超微结构比较 | 第44-45页 |
·转基因甘蔗与未转基因甘蔗叶绿体蛋白的差异表达 | 第45-49页 |
·转基因甘蔗与未转基因甘蔗叶绿体蛋白双向电泳图谱比较 | 第45-48页 |
·转基因甘蔗与未转基因甘蔗叶绿体差异蛋白的质谱分析 | 第48-49页 |
·转基因甘蔗与非转基因甘蔗叶片光合特性的比较 | 第49-50页 |
3. 讨论 | 第50-54页 |
第四章 转ScMV-CP基因甘蔗抗花叶病的的生理生化基础 | 第54-70页 |
1 材料与方法 | 第54-57页 |
·材料 | 第54页 |
·接种方法 | 第54-55页 |
·测定方法 | 第55-57页 |
·水杨酸(SA)含量测定 | 第55页 |
·H_2O_2含量测定 | 第55页 |
·过氧化物酶(POD)活性测定 | 第55页 |
·超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 | 第55-56页 |
·过氧化氢酶(CAT)活性测定 | 第56页 |
·抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性测定 | 第56页 |
·丙二醛(MDA)含量测定 | 第56页 |
·苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性测定 | 第56页 |
·多酚氧化酶(PPO)活性测定 | 第56-57页 |
·总酚和类黄酮含吸测定 | 第57页 |
·数据分析 | 第57页 |
2 结果与分析 | 第57-67页 |
·SA与转基因甘蔗的抗病性关系分析 | 第57-58页 |
·转基因甘蔗病毒接种后SA含量的变化 | 第57-58页 |
·转基因甘蔗接种后活性氧代谢的变化 | 第58-64页 |
·过氧化氢(H_2O_2)含量 | 第58-59页 |
·SOD比活性变化 | 第59页 |
·POD活性变化 | 第59-60页 |
·CAT活性变化 | 第60-61页 |
·APX活性变化 | 第61页 |
·丙二醛(MDA)含量变化 | 第61-62页 |
·不同无性系接种后游离SA、H_2O_2以及相关的酶之间的关系分析 | 第62-64页 |
·转基因甘蔗对PAL代谢的影响 | 第64-67页 |
·RAL活性变化 | 第64-65页 |
·PPO活性变化 | 第65页 |
·总酚含量变化 | 第65-66页 |
·类黄酮含量变化 | 第66-67页 |
3. 讨论 | 第67-70页 |
第五章 转ScMV-CP基因甘蔗抗花叶病的分子基础 | 第70-96页 |
1. 材料与方法 | 第70-79页 |
·材料 | 第70页 |
·病毒接种及取样 | 第70-71页 |
·生化试剂 | 第71页 |
·cDNA芯片杂交 | 第71-75页 |
·cDNA克隆测序及序列分析 | 第75页 |
·甘蔗Myb基因编码区的分离克隆 | 第75-77页 |
·目的片段测序和分析 | 第77页 |
·实时PCR半定量法分析甘蔗MYB基因表达 | 第77-79页 |
·叶片全蛋白的双向电泳及质谱分析 | 第79页 |
2 结果与分析 | 第79-92页 |
·RNA的质量分析 | 第79页 |
·ScMV诱导表达的cDNA基因芯片分析 | 第79-83页 |
·甘蔗MYB基因的克隆与表达分析 | 第83-89页 |
·MYB基因的克隆 | 第83页 |
·甘蔗MYB基因核苷酸序列及分析 | 第83-87页 |
·甘蔗MYB基因在表达分析 | 第87-89页 |
·转基因甘蔗与未转基因甘蔗叶片全蛋白的差异表达 | 第89-92页 |
·转基因甘蔗与未转基因甘蔗叶片全蛋白的双向电泳图谱比较 | 第89-91页 |
·转基因甘蔗与未转基因甘蔗叶片差异蛋白的质谱分析 | 第91-92页 |
3. 讨论 | 第92-96页 |
·转基因甘蔗抗病的分子基础 | 第92-93页 |
·Myb转录因子的片段克隆及表达分析 | 第93-94页 |
·转基因甘蔗抗病的蛋白基础 | 第94-96页 |
第六章 转ScMV-CP基因甘蔗环境安全性评价 | 第96-112页 |
1 材料与方法 | 第97-98页 |
·材料种植及土样采集 | 第97页 |
·方法 | 第97-98页 |
·田间主要害虫为害情况调查 | 第97页 |
·土壤微生物总数采用平板培养法 | 第97页 |
·土壤酶活性测定 | 第97页 |
·土壤pH值和电导率测定 | 第97页 |
·土壤微生物多样性测定 | 第97-98页 |
·土壤总DNA提取 | 第98页 |
·CP基因的PCR检测 | 第98页 |
·数据分析 | 第98页 |
2 结果与分析 | 第98-110页 |
·转基因甘蔗对田间非靶标害虫的影响 | 第98-99页 |
·转基因甘蔗外源CP基因的土壤水平转移 | 第99-100页 |
·转基因甘蔗对土壤可培养微生物数量的影响 | 第100-102页 |
·根际土壤卡那霉素抗性微生物数量的比较 | 第102-103页 |
·转基因甘蔗对根际土壤酶活性的影响 | 第103-106页 |
·转基因甘蔗对土壤pH值和土壤电导率的影响 | 第106-107页 |
·转基因甘蔗对土壤细菌多样性的影响 | 第107-110页 |
3. 讨论 | 第110-112页 |
结论 | 第112-119页 |
1. 转基因甘蔗抗病稳定性和增产基础 | 第112-114页 |
·转基因甘蔗抗病稳定性和农艺性表现 | 第112-113页 |
·转基因甘蔗增产的光合基础 | 第113-114页 |
2. 转基因甘蔗抗病的分子生理基础 | 第114-117页 |
·转基因甘蔗抗病的生理生化基础 | 第114-115页 |
·转基因甘蔗抗病的分子基础 | 第115页 |
·转基因甘蔗抗病的可能机制初探 | 第115-117页 |
3. 转基因甘蔗的环境安全性评价 | 第117页 |
4. 展望 | 第117-118页 |
5. 在学期间发表的论文 | 第118-119页 |
参考文献 | 第119-137页 |
附录 | 第137-142页 |
致谢 | 第142页 |