| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 月季RcLEA基因的克隆和功能研究 | 第13-82页 |
| 1 植物胚胎发育后期丰富蛋白的研究进展和月季抗性研究现状与意义 | 第13-30页 |
| 1.1 植物胚胎发育后期丰富蛋白的研究进展 | 第13-26页 |
| 1.1.1 LEA蛋白的分类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 LEA蛋白的序列特征 | 第14-18页 |
| 1.1.3 LEA蛋白的结构 | 第18-19页 |
| 1.1.4 LEA蛋白结合离子的特性和磷酸化 | 第19-20页 |
| 1.1.5 LEA蛋白的表达模式和亚细胞定位 | 第20-22页 |
| 1.1.6 LEA蛋白的功能 | 第22-26页 |
| 1.2 月季的研究状况及其抗性研究意义 | 第26-27页 |
| 1.2.1 月季介绍 | 第26页 |
| 1.2.2 月季抗性研究意义 | 第26-27页 |
| 1.2.3 月季的研究状况 | 第27页 |
| 1.3 RcLEA的研究基础 | 第27-30页 |
| 研究技术路线 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-51页 |
| 2.1 材料 | 第31-33页 |
| 2.1.1 月季 | 第31页 |
| 2.1.2 拟南芥 | 第31-32页 |
| 2.1.3 烟草 | 第32页 |
| 2.1.4 菌株和载体 | 第32-33页 |
| 2.1.5 试剂和仪器 | 第33页 |
| 2.2 方法 | 第33-51页 |
| 2.2.1 月季RcLEA基因克隆 | 第33-40页 |
| 2.2.2 RcLEA蛋白氨基酸序列比对和聚类分析 | 第40页 |
| 2.2.3 月季RcLEA基因的高温诱导表达模式 | 第40页 |
| 2.2.4 过表达RcLEA基因大肠杆菌的胁迫评价 | 第40-42页 |
| 2.2.5 转基因拟南芥综合评价 | 第42-46页 |
| 2.2.6 RcLEA原核表达和纯化 | 第46-48页 |
| 2.2.7 RcLEA对蛋白和酶活的保护 | 第48-49页 |
| 2.2.8 亚细胞定位 | 第49-50页 |
| 2.2.9 双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)实验 | 第50-51页 |
| 3 结果与讨论 | 第51-66页 |
| 3.1 RcLEA的克隆和序列分析 | 第51-54页 |
| 3.2 RcLEA的亚细胞定位 | 第54-55页 |
| 3.3 RcLEA的表达在耐热月季品种SM中受到高温诱导 | 第55页 |
| 3.4 在大肠杆菌中表达RcLEA能够提高大肠杆菌对高低温、盐和氧化胁迫的耐受性 | 第55-56页 |
| 3.5 拟南芥中过表达RcLEA增强了拟南芥对高温的抗性 | 第56-59页 |
| 3.6 拟南芥中过表达RcLEA增强了拟南芥对低温的抗性 | 第59-60页 |
| 3.7 拟南芥中过表达RcLEA对拟南芥的盐胁迫、渗透胁迫的耐受性没有影响 | 第60-62页 |
| 3.8 在体外,RcLEA可以在多种胁迫下保护LDH的活性,防止CS聚合,维持大肠杆菌蛋白组的稳定 | 第62-64页 |
| 3.9 RcLEA自身能够相互作用,以同源二聚体或寡聚体形式起作用 | 第64-66页 |
| 4 小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-82页 |
| 第二章 月季小分子热激蛋白RcHsp17.8启动子在拟南芥中的表达分析 | 第82-110页 |
| 1 植物热激蛋白研究现状 | 第82-89页 |
| 1.1 HSPs的分类和分子伴侣的功能 | 第82-83页 |
| 1.2 植物sHSP的研究进展 | 第83-86页 |
| 1.2.1 sHSP的结构与分子伴侣功能 | 第83-84页 |
| 1.2.2 植物sHSP的分类和结构特性 | 第84-85页 |
| 1.2.3 植物sHSP的表达模式与功能 | 第85-86页 |
| 1.3 植物sHSP的表达调控 | 第86-87页 |
| 1.4 RcHsp17.8研究基础与意义 | 第87-89页 |
| 研究技术路线 | 第89-90页 |
| 2 材料与方法 | 第90-93页 |
| 2.1 材料 | 第90页 |
| 2.1.1 拟南芥 | 第90页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第90页 |
| 2.1.3 试剂和仪器 | 第90页 |
| 2.2 方法 | 第90-93页 |
| 2.2.1 RcHsp7.8启动子序列分析 | 第90页 |
| 2.2.2 载体构建 | 第90-91页 |
| 2.2.3 拟南芥转基因及阳性植株筛选 | 第91页 |
| 2.2.4 提取转基因拟南芥DNA及PCR鉴定阳性植株 | 第91-92页 |
| 2.2.5 RcHsp17.8全长启动子在不同发育阶段的不同组织中的热激表达 | 第92页 |
| 2.2.6 RcHsp17.8全长启动子在不同胁迫下的表达 | 第92页 |
| 2.2.7 RcHsp17.8启动子缺失片段在高温胁迫下的表达 | 第92-93页 |
| 2.2.8 GUS染色 | 第93页 |
| 3 结果与讨论 | 第93-101页 |
| 3.1 RcHsp17.8启动子顺式作用元件分析 | 第93-95页 |
| 3.2 构建表达载体 | 第95-97页 |
| 3.3 不同发育阶段不同组织中RcHsp17.8启动子的表达 | 第97-98页 |
| 3.4 RcHsp17.8启动子对其他非生物胁迫的响应 | 第98页 |
| 3.5 RcHsp17.8启动子的缺失分析 | 第98-101页 |
| 4 小结 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 第三章 GIGANTEA参与非生物胁迫响应的调控机理 | 第110-145页 |
| 1 GIGANTEA(GI)功能的研究进展 | 第110-116页 |
| 1.1 GI与开花时间调控 | 第110-112页 |
| 1.2 GI与生物钟调控 | 第112-113页 |
| 1.3 GI与非生物胁迫 | 第113-114页 |
| 1.4 GI与胁迫下的开花 | 第114页 |
| 1.5 Gl的其他功能 | 第114页 |
| 1.6 GI与胁迫耐受性研究的意义 | 第114-116页 |
| 研究技术路线 | 第116-117页 |
| 2 材料与方法 | 第117-127页 |
| 2.1 材料 | 第117-118页 |
| 2.1.1 拟南芥 | 第117页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第117页 |
| 2.1.3 试剂和仪器 | 第117-118页 |
| 2.2 方法 | 第118-127页 |
| 2.2.1 gi、wrky44突变体胁迫处理 | 第118-119页 |
| 2.2.2 定量PCR检测胁迫相关基因表达 | 第119页 |
| 2.2.3 GI-GR诱导体系建立和应用 | 第119-121页 |
| 2.2.4 ChIP实验 | 第121-126页 |
| 2.2.5 SOS1活性测定 | 第126-127页 |
| 3 结果与讨论 | 第127-138页 |
| 3.1 gi-4突变体对多种非生物胁迫敏感且与光周期无关 | 第127-131页 |
| 3.2 DGE数据分析 | 第131-132页 |
| 3.3 胁迫相关基因在gi-4中的表达 | 第132-133页 |
| 3.4 AtWRKY44可能是GI的直接下游基因 | 第133-136页 |
| 3.5 WRKY44参与盐胁迫响应 | 第136页 |
| 3.6 gi-4中SOSI活性下降 | 第136-138页 |
| 4 小结 | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-145页 |
| 发表论文及专利申请 | 第145-146页 |
| 致谢 | 第146-147页 |
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