| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-33页 |
| 1 细胞色素P450酶的研究进展 | 第12-23页 |
| ·药物代谢酶在药物代谢中的作用 | 第12-14页 |
| ·药物的吸收 | 第12-13页 |
| ·药物的分布 | 第13页 |
| ·药物的代谢 | 第13-14页 |
| ·药物的排泄 | 第14页 |
| ·CYP450酶的分布与命名 | 第14-20页 |
| ·CYP450的分布与命名 | 第14-15页 |
| ·CYP450酶的结构 | 第15-16页 |
| ·CYP450的电子转运系统 | 第16-18页 |
| ·主要的CYP家族的介绍 | 第18-20页 |
| ·CYP450的遗传多态性及其对药物代谢的影响 | 第20-21页 |
| ·CYP450的遗传多态性 | 第20页 |
| ·代谢表型的检测 | 第20-21页 |
| ·CYP450基因多态性与药物疗效 | 第21页 |
| ·CYP450在药物相互作用中的作用 | 第21-23页 |
| ·体外研究中选用的底物和抑制剂 | 第22-23页 |
| 2 CYP2D6的研究现状 | 第23-33页 |
| ·CYP2D6的基因结构 | 第24页 |
| ·CYP2D6的三维立体结构 | 第24-25页 |
| ·CYP2D6的晶体结构 | 第24-25页 |
| ·CYP2D6的底物识别位点 | 第25页 |
| ·CYP2D6的遗传多态性及其对药物代谢的影响 | 第25-31页 |
| ·CYP2D6遗传多态性 | 第26-27页 |
| ·CYP2D6基因多态性对药物代谢的影响 | 第27-29页 |
| ·根据CYP2D6的基因多态性进行药物剂量调整 | 第29-31页 |
| ·CYP2D6在药物相互作用中的影响 | 第31-33页 |
| 第二章 人CYP2D6基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达 | 第33-49页 |
| 1 材料 | 第33-37页 |
| ·菌株及克隆载体 | 第33页 |
| ·穿梭载体pYES2/CT | 第33页 |
| ·酿酒酵母ycy107 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34-36页 |
| ·培养大肠杆菌的培养基 | 第34-35页 |
| ·培养酵母的培养基 | 第35-36页 |
| ·主要溶液 | 第36-37页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第36页 |
| ·酵母裂解缓冲液 | 第36页 |
| ·聚丙烯氨酰胺凝胶电泳及Western-blotting缓冲液 | 第36-37页 |
| ·其他常用缓冲液 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-42页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第37-40页 |
| ·PCR引物 | 第37-38页 |
| ·CYP2D6野生型cDNA的扩增 | 第38页 |
| ·CYP2D6等位基因突变体和单位点突变体cDNA的扩增 | 第38-39页 |
| ·CYP2D6野生型和突变体重组质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·重组质粒在酵母系统中的表达及鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒转化酵母 | 第40-41页 |
| ·小量诱导表达 | 第41页 |
| ·Western blotting鉴定CYP2D6的表达 | 第41页 |
| ·酵母微粒体的制备 | 第41-42页 |
| ·酵母的大量诱导表达 | 第41-42页 |
| ·微粒体的制备 | 第42页 |
| ·微粒体蛋白浓度的测定 | 第42页 |
| ·CYP2D6酶定量 | 第42页 |
| 3 实验结果 | 第42-46页 |
| ·CYP2D6基因重组质粒的构建 | 第42-45页 |
| ·CYP2D6野生型cDNA的扩增 | 第42-43页 |
| ·CYP2D6各个等位基因突变株和单点突变株cDNA的扩增 | 第43-44页 |
| ·CYP2D6重组质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| ·Western-blotting鉴定CYP2D6酶的表达 | 第45页 |
| ·微粒体蛋白浓度的测定 | 第45-46页 |
| ·CYP2D6酶的CO定量 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| ·突变位点引入CYP2D6野生型cDNA | 第47页 |
| ·酵母表达系统的选择 | 第47-48页 |
| ·一氧化碳差示光谱法测定CYP2D6的含量 | 第48-49页 |
| 第三章 CYP2D6酶体外动力学分析 | 第49-65页 |
| 1 材料和仪器 | 第49页 |
| ·试剂和微粒体 | 第49页 |
| ·主要溶液 | 第49页 |
| ·仪器 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-52页 |
| ·荧光底物AMMC为底物测定CYP2D6野生型和各突变株的酶活和酶动力学参数 | 第49-51页 |
| ·以AMMC为底物的酶活性检测 | 第49-50页 |
| ·AMHC标准曲线的建立 | 第50页 |
| ·以AMMC为底物酶动力学分析 | 第50-51页 |
| ·以药物探针底物丁呋洛尔为底物测定CYP2D6野生型和各突变株酶活和动力学参数 | 第51-52页 |
| ·以丁呋洛尔为底物的酶活性检测 | 第51-52页 |
| ·1-羟-丁呋洛尔标准曲线的建立 | 第52页 |
| ·以丁呋洛尔为底物的酶动力学分析 | 第52页 |
| ·数据分析 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-62页 |
| ·以AMMC为底物检测各CYP2D6酶活和动力学参数 | 第52-58页 |
| ·AMMC为底物的酶活性测定 | 第52-54页 |
| ·MHC标准曲线的建立 | 第54页 |
| ·以AMMC为底物的酶动力学分析 | 第54-58页 |
| ·以丁呋洛尔为底物的酶活性检测和动力学分析 | 第58-62页 |
| ·以丁呋洛尔为底物的酶活性检测 | 第58-59页 |
| ·1-羟-丁呋洛尔标准曲线的建立 | 第59-60页 |
| ·以丁呋洛尔为底物的酶动力学分析 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| ·CYP2D6基因多态性对酶活性的影响 | 第62-63页 |
| ·荧光检测法和HPLC检测法的比较 | 第63-65页 |
| 第四章 药物相互作用研究 | 第65-74页 |
| 1 材料 | 第65页 |
| ·实验材料与试剂 | 第65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| 2 方法 | 第65-67页 |
| ·基于荧光底物AMMC的高通量药物筛选 | 第65页 |
| ·基于药物探针底物丁呋洛尔的药物筛选 | 第65-66页 |
| ·数据处理 | 第66-67页 |
| 3 结果 | 第67-70页 |
| ·两种方法进行药物筛选 | 第67-69页 |
| ·奎尼丁对CYP2D6酶的抑制 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-74页 |
| ·体外抑制CYP450的药物筛选方法 | 第70-72页 |
| ·CYP2D6多态性与药物-药物相互作用 | 第72-73页 |
| ·CYP2D6与临床用药中的药物-药物相互作用 | 第73-74页 |
| 全文小结 | 第74-76页 |
| 1 小结 | 第74页 |
| 2 工作展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 发表文章 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
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