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烟草蚀纹病毒外壳蛋白基因的克隆、原核表达及抗血清的制备
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摘 要 根据已报道 烟草蚀纹病毒 (TEV) 外壳蛋白基因序列，合成两个寡聚核苷酸引物，采用ＲＴ - ＰＣＲ的方法获得 烟草蚀纹病毒山东（TEV-SD）分离物的外壳蛋白（CP）基因的 cDNA ，然后以 获得的 cDNA 为模板进行 PCR 扩增。将所得的 PCR 产物通过 T4 DNA 连接酶连接到原核表达载体 PET-22b （+）中，并转化大肠杆菌 BL21 。 序列分析表明： TEV -SD 的 CP 基因全长 789bp ，编码 263 个氨基酸；与 GenBank 中，已报道的 TEV 分离物的核苷酸序列有极高的同源性，达 94.1% ～ 98.6% 。37℃培养条件下， 经 IPTG（终浓度 1mmol/L ）诱导，SDS-PAGE 电泳显示，表达的融合蛋白分子质量约为 33kDa 。用表达的特异性蛋白制备抗原，免疫家兔制备出病毒特异抗血清；抗血清的效价为 1/2048 ，且具有良好的特异性。
关键词 烟草蚀纹病毒；外壳蛋白基因；原核表达；抗血清
Cloning and Prokaryotic Expression of Coat Protein Gene of Tobacco Etch Virus and Preparation of Viral-specific Antiserum
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