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玉米雄性不育性基因工程研究
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作者简介：刘大文，男，1962年12月生，1996年从师于戴景瑞教授和谢友菊教授，于1999年７月毕业于中国农业大学作物遗传育种学专业，并获农学博士学位。
摘要：用Ａ９启动子的引物从拟南芥菜基因组中扩增得到一条约350bp的片段。序列分析表明，该片段为360bp，TATA box、TGTGG、TGTGA两个Ｍotifs皆完整，与已报导序列的同源性为99.2%，表明为Ａ９启动子。该启动子能启动GUS基因在玉米花药中特异表达，GUS酶活性为１.７２nm.min-1.mg-1.protein。以Ｚm13启动子、Ａ９启动子、Barnase 基因、Barstar基因、抗除草剂基因35S-Bar-nos3'构建雄性不育基因表达载体pZMSBAR、pABBN和恢复基因表达载体pZRFBAR。用pUC18替换pBBN的骨架，得到较小的表达载体pUBBN。用基因枪将不育基因Zm13-Barnase(pZMSBAR)转化玉米愈伤组织，再生出40多个株，其中24株移载成活并生长发育至成熟，７个植株结实。PCR扩增表明16个植株呈阳性。I-KI染色观察和花粉离体萌发表明，有５个植株花粉部分不育。Southern blot 分析证实这５个植株中整合了Barnase基因。用基因枪将不育基因TA29-Barnase(pUBBN)和A9-Barnase(pABBN)转化玉米愈伤组织，再生出２０多个植株，各对其中的６个植株进行PCR扩增，分别有３个和２个植株出现0.35kb的特异扩增带。
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