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clock基因干扰质粒的构建及干扰效率测定
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【中医养身论文】作者：付天明 鲁芳 刘延友 汪宇辉 江舟 甘露 薛建新 邹晏 王正荣【摘要】 目的：构建clock基因的干扰质粒，为深入研究clock基因在信号转导通路中的作用提供有效手段。方法：采用Mfolder生物软件选择2个clock基因干扰位点，并根据3个干扰片段及一个阴性对照片段，定向克隆到pGenesil1干扰载体并测序验证。将干扰质粒及对照质粒分别转染至NIH3T3细胞，并通过检测RTPCR产物量以获得干扰效率。结果：RTPCR产物检测结果显示干扰质粒pGenesil1/clockⅡ干扰效率最高，其clock表达量降低了74%，而pGenesil1/clockⅠ干扰组clock表达量只降低了2%。结论:成功构建了对clock基因具有显著干扰效率的pGenesil1/clockⅡ干扰质粒，为进一步研究clock基因的功能奠定了基础。
【关键词】 时间生物学；生物节律；干扰质粒；RNA干扰；RTPCR；clock基因
时间生物学（Chronobiology）是当前生命科学的热点领域，其对生物节律的研究以新颖而独特的观点揭示着自然界和人类社会的纷繁现象，并从本质上阐释生命活动的内在规律。自1985年第一个与生物钟相关的基因period从果蝇体内被成功克隆以来，一系列节律基因（Circadian gene）比如clock,rigui,bmal1,timeless,cry,frq,vvd,noc,kai等被陆续发现[1-7]。他们在许多基本生物功能，包括体温[8]、呼吸[9]、睡眠[10]、进食[11]、血压[12]、血糖、内分泌[13,14]等诸多稳态中发挥着关键作用，构成生物节律的固有物质基础。clock基因作为调控生物节律现象的核心基因之一，对维持正常的近日节律（Circadian rhythm）起着关键作用[15]。目前与clock基因功能相关的研究在不断继续，而至从RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术问世以来，它已经成为一项非常特异、高效的工具被广泛应用于各种基因
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