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体外扩增后人脂肪源干细胞的体外免疫调节功能的实验研究
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【中医养生理解的论文】脂肪源干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)是来源于脂肪组织的一类具有自我更新和多项分化能力的成体干细胞。越来越多的研究结果表明:ADSCs与同样来源于中胚层的骨髓间充质干细胞都具有低免疫原性及免疫调节功能,可以作为良好的种子细胞应用于组织修复及细胞治疗。缘于临床应用的需要,种子细胞被期望可以在尽可能少的人体组织中分离并扩增出足够的细胞量用于研究和治疗。因此,本研究观察ADSCs在扩增过程中表面标记的变化,并通过扩增至第5代的ADSCs体外调节淋巴细胞的增殖能力,研究ADSCs在扩增后是否仍然具有低免疫源性及免疫调节的能力。 1材料和方法 1.1人脂肪源干细胞的体外培养 人脂肪组织来自脂肪抽吸术患者的废弃脂肪组织。脂肪抽吸物以PBS反复冲洗后,加入等体积0.1%的Ⅰ型胶原酶(Sigma公司),37℃恒温摇床振荡消化1 h,1 200 g/min离心10 min,弃去上层漂浮的脂肪组织后将细胞沉淀接种于培养皿,加入含有10%FBS的L-DMEM(Gibco公司)培养液,置于37℃、5%CO2、100%饱和湿度的条件下培养。待细胞融合至70%~80%时,以0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化传代,取第2及第5代ADSCs备用,并作者单位:830054新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市新疆医科大学第一附属医院血液科(白雯,江明,);200235上海市上海组织工程研究与开发中心(崔磊,尹烁)。取部分细胞悬液进行流式细胞检测。 1.2人脂肪源干细胞的流式细胞仪检测 培养至第2代及第5代ADSCs以0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化后收集细胞,细胞浓度调整为(1.5~3)×106 cells/mL,离心,将沉淀细胞用100μL流式缓冲液(含1%FBS的PBS)重悬,分别加入鼠抗人FITC标记的CD34、CD14、CD44、CD29、CD166抗体和鼠抗人PE标记的CD45、CD105抗体(1∶10,Serotec公司),4℃闭光孵育45~60 min
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