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大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63毒性检测及佐剂效果研究*
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【中医学院毕业论文】摘 要:目的 对已构建的大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63进行表达、纯化、毒性检测,并对其佐剂活性进行研究。方法 采用已知的最佳诱导表达条件进行诱导表达,诱导表达产物经亲和层析、纯化浓缩后,进行毒性检测。将纯化后的mLT63联合幽门螺旋杆菌(Hp)亚单位疫苗UreB、Omp11经口途径免疫BALB/c小鼠,免疫后取血清、胃组织提取液、粪便提取液进行ELISA试验,检测其中的特异性抗体水平,将结果进行统计分析。结果 经家兔回肠袢毒性试验验证本室构建大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63没有毒性,mLT63联合Hp亚单位疫苗UreB、Omp11免疫小鼠实验证实mLT63具有佐剂活性。结论 本室构建、表达的大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63无毒,并具有免疫佐剂的活性。
关键词:大肠杆菌不耐热肠毒素;突变体;佐剂
应用生物技术得到的纯化抗原往往在粘膜表面接种时免疫原性较弱,并且容易诱导免疫耐受。为加强局部粘膜免疫,激活粘膜免疫应答,使疫苗发挥最大作用,可通过在疫苗中加入适当的免疫佐剂进行免疫接种。较理想的粘膜佐剂应该高效、安全,能激活粘膜免疫系统,在其存在的情况下抗原经粘膜供给可引发抗原特异性的全身和粘膜局部的体液和细胞介导的免疫应答。
大肠杆菌不耐热肠毒素(heat-labile enterotox-in,LT)是产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenicEscherichia coli,ETEC)产生的一种对热敏感的毒素,是引起人及哺乳动物腹泻的主要因素之一。LT是迄今为止发现作用最强的免疫原之一,并且具有很好的粘膜免疫佐剂作用,它能通过增加抗原的摄入和呈递,有效地在粘膜水平提高免疫原性,还能诱导代写论文B细胞成熟和免疫刺激细胞因子的产生〔1〕。此外,LT不能诱导耐受并且能够中止耐受诱导。但LT的高毒性限制了它的应用,利用基因工程构建的LT无毒衍生物突变体能够弥补这样的不足。LT第63位氨基酸突变,使丝氨酸诱变为赖氨酸,使得LTA失去NAD蛋白结合位点,即可无毒并具有较强的免疫原性和佐剂性,极有可能
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