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细粒棘球绦虫成虫全长cDNA质粒文库的构建及鉴定

【中医学免费毕业论文】作者:吕刚,芦亚君,范志刚,史大中,王虎,韩秀【摘要】 目的:构建细粒棘球绦虫(E.g.)成虫全长cDNA质粒文库,并检测文库质量。方法:提取E.g.成虫mRNA,应用SMART方法构建pBluescript II SK全长cDNA质粒文库,检测文库的重组率及容量;用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,检测插入片段大小。随机挑选阳性重组克隆5′端测序,归并unigene,计算unigene得率,全长性判定主要根据同源全长基因5'末端进行比较判定并计算全长率。结果:成功构建E.g.成虫全长cDNA质粒文库。文库的重组率为95.04%,库容量1.13×106;平均插入片段长度约为1.2kb。24个随机阳性克隆测序,unigene比例为69.57%,全长性比率为64.71%。结论:成功构建E.g.成虫全长cDNA质粒文库,文库质量良好。
【关键词】 细粒棘球绦虫;成虫;全长cDNA质粒文库;构建;鉴定
[ABSTRACT] Objective: To construct and evaluate fullLength cDNA library of adult Echinococcus granulosus(E.g.). Methods:mRNA was extracted from the adult E.g. and used for the construction of fulllength cDNA library using SMARTpBluescriptⅡSK kit. The recombination rate and capability of the library was measured and the length of insert fraction of the positive recombinant clones was tested by PCR. Positive recombinant clones were randomly selected for 5'en
 
 
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