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降钙素基因相关肽衍生物的优化表达及纯化

【中药学毕业论文】作者:肖莉杰 林平 陈文 姜颖 刘紫君 于晓光【摘要】 目的 优化重组降钙素基因相关肽衍生物(CGRPVY)蛋白的表达体系,并利用亲和层析获得高纯度的重组蛋白。方法 在前期研究的基础上,将构建的pET32a(+)rhCGRPVY在大肠埃希菌中表达,分别对时间、温度和IPTG的浓度进行优化。采用NiNTA亲和层析柱分离纯化可溶性蛋白,YLN凝胶影像分析系统和Bradford法检测纯化蛋白的纯度与含量。结果 重组蛋白的最佳表达条件为诱导时间4 h、诱导温度37℃、IPTG浓度0.75 mmol/L,重组蛋白的最高表达量占菌体总蛋白的70%~80%,高效表达的CGRPVY融合蛋白大部分可溶,纯化后蛋白纯度可达90%以上,蛋白浓度约为0.09 mg/ml。结论 成功优化了蛋白表达条件,并用亲和层析法纯化出大量可溶性TrxArhCGRPVY。
【关键词】 降钙素基因相关肽衍生物;VY;优化;纯化
【Abstract】 Objective To optimize the expression level of engineering strain of calcitonin generelated peptide derivant(CGRPVY), then use affinity chromatograph to obtain recombinant protein of high purity. Methods Based on the groundwork of former research, an expression vector pET32a(+)rhCGRPVY which was constructed by this group was used to express TrxArhCGRPVY in E coli. Expression of TrxArhCGRPVY was optimized on the induction time, temperature
 
 
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