| | | 反相高效液相色谱法测定尿液4种肾病标志物
| | 医学社会实践论文 作者：孔宇，赵永席，王波，吴红，马国营
【关键词】 糖尿病肾病
Reversedphase high performance liquid chromatography assay for determining 4 kinds of markers of diabetic nephropathy in urine
【Abstract】 AIM: To establish a new reversedphase high performance liquid chromatography (RPHPLC) method for assay 4 kinds of nonproteinnitrogen markers of human diabetic nephropathy (DN), creatine (Cr), creatinine (Cn), urea (U) and uric acid (Ua) in DN patients urines. METHODS: The urine samples were assayed by RPHPLC on C18 column (200 mm×4.6 mm, id 5 μm) at the ambient temperature and a wave length of 200 nm, using a 10 mmol/L pH 6.86 phosphate buffer ［consisted 30%(V/V) methanol］ as mobile phase with the flow rate of 0.9 mL/min. RESULTS: Baseline separation of the urine could be easily achieved in 5 min after a simple sample preparation. The method also displayed a high reproducibility (RSD values of retention time and peak area were no more than 3%) and the calibration curves showed good linearities in the range of 5-300 μmol/L, 10-200 μmol/L, 1-30 μmol/L, 10-1500 μmol/L for Cr, Cn, U and Ua respectively. CONCLUSION: This method has great potential for routine assay of clinical urine samples and monitoring DN early.
【Keywords】 reversed high performance liquid chromatography; diabetic nephropathy; nonprotein nitrogen; urine
【摘要】 目的医学社会实践论文：建立糖尿病患者尿液中与肾病相关的医学社会实践论文非蛋白氮代谢产物(肌酸、肌酐、尿素和尿酸)的反相高效液相色谱分离分析方法. 方法：采用Agilent C18（200 mm×4.6 mm, 内径5 μm）色谱柱，流动相含30％(体积比)甲醇和10 mmol/L，pH 6.86的磷酸缓冲溶液，流速0.9 mL/min，检测波长200 nm，柱温为室温. 结果：在5 min内可对患者尿液中上述4种物质同时进行测定，样品前处理简单，重现性较好(迁移时间和峰面积的RSD均≤3%)，线性范围较宽（肌酸：5~300 μmol/L, 肌酐：10~200 μmol/L, 尿素：1~30 mmol/L, 尿酸：10~1500 μmol/L）. 结论：此法完全适用于临床上患者尿液的日常分析和早期肾病的监测.
【关键词】 反相高效液相色谱；糖尿病肾病；非蛋白氮；尿样
0引言
糖尿病并发肾病（diabetic nephropathy, DN）是糖尿病患者致死的重要原因之一，已引起了人们的广泛关注. 非蛋白氮代谢产物如肌酸(creatine, Cr)、肌酐(creatinine, Cn)、尿素(urea, U)和尿酸(uric acid, Ua)即是与DN相关的几种物质. 已报道的有关这些物质的分离分析方法主要有比色法［1］、酶法［2］、液相色谱法［3-6］、毛细管电泳法［7-9］等. 其中比色法和酶法通常只能测定单一的物质，而且尿液中的一些内源性物质对测定有干扰；液相色谱法则多集中在对某一种或部分物质的测定上；毛细管电泳测定这些标志物重现性有待于提高. 我们运用反相高效液相色谱法，对DN患者尿液中与DN相关的Cr, Cn, U和Ua这4种非蛋白氮代谢产物进行同时分离检测. 同时测定尿液中的4种物质目前还未见报道. 此法具有快速、灵敏度高和重现性好的特点，完全可运用于临床上患者尿液的日常分析和早期肾病的监测.
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