| | | 雌二醇的免疫胶体金试纸法检测
| | 医学检验论文【关键词】 雌二醇
雌二醇(17β-Estradiol)是天然雌激素的医学检验论文重要成分，为防止儿童性早熟等问题，食品中尤其是畜禽产品的医学检验论文雌二醇检测不容忽视。胶体金免疫层析技术(GICA)在检测小分子有机物方面越来越受到重视。其基本原理是胶体金颗粒能够稳定吸附蛋白质，而蛋白质的生物活性无明显变化，所以它可以取代酶标记抗体〔1，2〕。本实验采用标记有雌二醇单克隆抗体的胶体金颗粒与相对应的固定在硝酸纤维膜上的雌二醇结合物相结合，固定有雌二醇结合物的检测线处就显现明显的颜色〔3，4〕。本法具有灵敏度高、特异性强、简便快速、成本较低、结果容易判读等优点，适用于样品的初步筛选。
1 材料与方法
11 试剂与仪器 氯金酸(上海化学试剂厂)；牛血清白蛋白、卵清白蛋白、兔抗鼠多抗(天津联星生物公司)；雌二醇标准品、雌二醇单抗、17β-Estradiol-6-one6-(o-carboxymethvyoxime)美国Sigma公司)；其他试剂均为国产分析纯。硝酸纤维膜、玻璃纤维膜（美国Millipore公司)；Beckman Du530分光光度计(德国Beckman公司)；低温高速离心机(军事医学科学院）；点膜机(美国Bio-Dot公司)。
12 方法
121 胶体金的制备 用三蒸水溶解氯金酸，使其终浓度为01g／L。先进行沸水浴，待氯金酸溶液煮沸后，每100ml加入1％柠檬酸三钠25ml，再沸水浴下快速搅拌，直到氯金酸溶液的颜色稳定，继续沸水浴10min〔5〕，冷却至室温后，用透射电镜镜检并用分光光度计检测颗粒均匀度及粒度。最后置于4℃冰箱保存备用。
122 最适标记蛋白量的确定 用02mol／L K2CO3将胶体金溶液调至pH为82，然后取试管9支，分别加入10ml胶体金溶液。将雌二醇抗体逐级稀释后，各取等体积稀释液顺序加入上述试管中，混匀，另设一不加抗体的对照管。放置10min，在各管中加入01ml的10％NaCl，混匀后静置2h。观察各管中胶体金溶液变化，未加蛋白及加入量不足的溶液颜色由红变蓝，而加入蛋白量达到或超过时的溶液则保持不变。标记蛋白量即为最低稳定胶体金溶液不变色的蛋白量基础上再加20％。
|
| | |
| | | | <<<<<全文未完>>>>> 全文字数约$$$zishu$$$字 | |
| | |
| |
|
教育论文中心