| | | 注射用重组双功能水蛭素产品质量研究
| | 医学实践论文张艳玲，莫 炜Δ，王龙生，杨新英，宋后燕 【摘要】 本实验室构建了分泌型高效表达重组双功能水蛭素 (RGD-Hirudin) 的医学实践论文工程酵母，经发酵、纯化，获得重组双功能水蛭素纯品，其原液经质量分析，符合国家静脉注射用药的医学实践论文标准，可以用于制备静脉注射用粉针剂。
【关键词】 注射用重组双功能水蛭素；质量研究
【Abstract】 The expression plasmid，HD-pPIC9K，was contructed by inserting cDNA of RGD-hirudfin (RGD-Hirudin) in yeast expression vector pPIC9K. This clone was fermented for 3 days，and the purified RGD-Hirudin was gained after purification. Quality analyses were tested. The RGD-Hirudin was measured up to standard of injection.
天然水蛭素是凝血酶的特异抑制剂，从医用水蛭的唾液腺中提取而得，可与凝血酶形成摩尔比为1:1的非共价相结合的可逆复合物，对凝血酶有很高的亲和力，使凝血酶失去裂解纤维蛋白原的能力，抑制纤维蛋白的形成，因此，低浓度的水蛭素可有效地抑制血液凝固［1］。
我们在保留天然水蛭素原有的生物学作用的基础上，将 RGD 编码顺序融合在天然水蛭素 cDNA 基因中［2～5］。构建了含RGD编码顺序的水蛭素cDNA克隆HD-pPIC9K，表达质粒转化毕赤酵母后，经筛选获得高表达菌株，并建立工程菌株，实现了高效、分泌型表达 (另文发表)。
本文重点报道重组双功能水蛭素原液的质量研究。
1 材料与方法
1.1 抗凝比活性测定
1.1.1 试剂的配制 0.5%纤维蛋白原：纤维蛋白原(上海莱士血制品有限公司)0.5g，以100ml生理盐水溶解。凝血酶：中国生物制品检定所制备的凝血酶，依照标示量，用生理盐水复溶后成100NIU/ml。阴性对照：以生理盐水为样品，凝血酶加入后立即凝固。标准对照：德国 Hochest 公司生产的 Refludan，按照其标示活性溶解分装成 1600ATU/支 (即0.1mg/支)，冻干，具体操作步骤按说明书进行。
1.1.2 方法 凝血酶滴定法［1］(所有过程在37℃水浴中操作)。
1.1.3 抗凝活性计算 抗凝活性 (ATU/ml)=(n-1)×100×稀释倍数，n为添加凝血酶的次数，1为扣除本底1次(即最后一次加入凝血酶，纤维蛋白原凝固)，100为凝血酶活性单位100 NIU/ml，稀释倍数为所测定样品的稀释倍数。
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