| | | 胞嘧啶脱氨酶基因治疗消化道肿瘤研究进展
| | 西医学 评职称论文摘要: 胞嘧啶脱氨酶基因导入肿瘤细胞可将无毒性的西医学 评职称论文原药在肿瘤细胞内代谢为具细胞毒的西医学 评职称论文产物而发挥抗肿瘤效应。本文综述了该基因的克隆、作用机制和在消化道肿瘤治疗中的研究进展。
随着分子生物学的迅猛发展，基因治疗这一崭新方法尽管还多处于实验研究手段，却已显示出良好的应用前景[1]。自1991年Huber等[2]提出病毒导向的酶解原药疗法（virus directed enzyme prodrug therapy,VDEPT）以来，有关的基因研究成为热门课题。目前，一个新的基因治疗系统——EC-CD/5-FC（大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶）系统正日益受到高度关注[3]。本文就胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase,CD）基因治疗消化道肿瘤的现状作一综述。
CD基因的克隆
胞嘧啶脱氨酶是大肠杆菌代谢旁路中的一种酶，哺乳动物细胞中不含该酶。Austin等[4]于1992年首先从大肠杆菌株中采用传统方法提取质粒DNA，进一步分离、纯化并转染宿主菌，初步构建成原核细胞中表达的CD质粒载体，克隆了编码CD的大肠杆菌基因，利用阳性基因筛选方法，获得一携带10.8 kb的DNA插入质粒，其中一3 kb的DNA片段保留有CD酶活性。CK蛋白质分子量为52000,DNA序列分析显示一含427个氨基酸开放读码框架编码CD。
为证实CD基因在真核细胞中表达以发挥作用，研究者采用寡核苷酸突变（oligonucleotide site-directed mutagenesis） 技术，将CD基因起始密码子由GTG→ATG，从而产生一5’起始密码子，选择pRc/CMV真核表达载体，构建成真核表达质粒pCMV/CD-1。以脂质体法将pCMV/CD-1导入人结肠癌WiDr细胞系，生长抑制试验显示转染后的结肠癌细胞对5-FC的IC50（半数抑制浓度）为30μmol,而未转染的结肠癌细胞其IC50为17000μmol，表明转染有CD基因的结肠癌细胞对5-FC的敏感性提高了近560倍[5]。
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