| | | Endostatin抑制人卵巢癌细胞生长及其在裸鼠皮下移植瘤中的作用
| | 临床医学毕业论文 作者：刘梅梅，隋丽华，李佩玲，程丽
【关键词】 抑制
【关键词】 卵巢癌；移植瘤；内皮抑素；Bcl2/Bax
0引言
我们采用人浆液性乳头状囊腺癌SKOV3细胞系及其荷瘤鼠为研究对象，研究Endostatin对其增殖、凋亡的临床医学毕业论文影响及作用机制，为其应用于卵巢癌的临床医学毕业论文临床治疗提供试验依据.
1材料和方法
1.1材料
选用雌性6~8周龄BALB/c裸鼠10只，SPF条件下饲养. 人浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3由北京医科大学人民医院妇产科馈赠，用RPMI1640（含10 g/L小牛血清）培养基于37℃, 50 mL/L CO2条件下培养. Endostatin购自烟台麦得津生物工程公司，置于4℃保存. 抗Bcl2，抗Bax mAb及SP试剂盒购自北京中衫试剂公司.
1.2方法
1.2.1MTT法测定SKOV3细胞生长抑制率分组：PBS对照组（10 mmol/L PBS）和实验组（0.1，1.0，5.0，10.0和15.0 mg/L Endostatin）. SKOV3细胞以5×107/L密度接种于96孔板，每组设定6个平行孔，并设定空白对照. 细胞贴壁培养24 h后，分别加入上述不同浓度的药物，作用48 h后测定细胞A490值. 计算Endostatin对卵巢癌细胞SKOV3生长的影响和抑制情况. 抑制率=（PBS对照组A490-药物组A490）/PBS对照组A490×100%.
1.2.2透射电镜下观察SKOV3细胞凋亡实验组SKOV3细胞作用不同时间（24，48和72 h）后，消化离心，用4℃，0.25 g/L戊二醛固定，0.1 g/L锇酸后固定，系列乙醇丙酮脱水，环氧树脂包埋，制成超薄切片，透射电镜下观察细胞凋亡形态.
1.2.3免疫细胞化学检测凋亡调控相关蛋白质表达的变化实验组SKOV3细胞爬片培养作用不同时间（24，48和72 h）后，丙酮室温固定10 min，进行免疫细胞化学SP法染色. 按说明书操作，DAB显色. 结果判定：以细胞核和细胞质呈明确的棕黄色为阳性染色.
1.2.4Endostatin对裸鼠肿瘤生长的影响
1.2.4.1裸鼠皮下瘤模型的建立已培养的SKOV3细胞，使细胞浓度达到5×1010/L，从裸鼠右肩胛部近腋窝处进针，每只裸鼠注射一点，约1×107个细胞. 观察接种部位有无渗出、肿瘤生长及裸鼠状况，待皮下瘤体积约100 mm×100 mm×100 mm时分组实验.
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