| 含有非甲基化CpG的双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响
| | 教育论文下载 作者：安蔚，赵苗青，李雅林，李松，康莉，宋文刚
【关键词】 甲基化
Stimulatory effect of bifidobacteria DNA containing unmethylated CpG motifs on maturation of bone marrowderived dendritic cells
【Abstract】 AIM: To explore the effect of bifidobacteria DNA containing unmethylated CpG motifs (CpG DNA) on the maturation of bone marrowderived dendritic cells (BMDC). METHODS: The genomic DNA of bifidobacteria was extracted and purified, and the methylated degree of CpG motifs was tested. Cell phenotypes and antigens uptake of BMDC were analyzed by flow cytometry. The levels of IL6, IL12(p40) and TNFα were detected by ELISA and T cell proliferation was detected by 3HTdR incorportation test. RESULTS: Treated with bifidobacteria DNA for 24 h, BMDC expressed a high level of Ia, CD40, CD86 and CD11c molecules, significantly increased the secretion of IL6, IL12 (p40) and TNFα and significantly enhanced the pro
liferation of allogenic and homogenic T cells. CONCLUSION: Bifidobacteria DNA has remarkable stimulatory effects on BMDC maturation and antigenpresenting function.
【Keywords】 bifidobacteria DNA; dendritic cells; mice
【摘要】 目的教育论文下载： 探讨双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞(BMDC)成熟的教育论文下载影响. 方法： 纯化提取双歧杆菌DNA，并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度；FACS检测BMDC的吞噬功能和表面标志分子，ELISA法检测BMDC分泌细胞因子水平，3HTdR掺入法检测T淋巴细胞增殖能力. 结果： 双歧杆菌DNA诱导24 h后BMDC高表达Ia, CD40, CD86和CD11c分子，明显增加IL6, IL12(p40), TNFα的分泌，显著增强同种异体和自体T细胞增殖的能力. 结论： 双歧杆菌DNA能够促进BMDC成熟，增强BMDC的抗原提呈能力.
【关键词】 双歧杆菌DNA；树突细胞；小鼠
0引言
树突状细胞(dendritic cells, DC)是机体功能最强的专职抗原提呈细胞，它能高效摄取、加工处理和提呈抗原，有较强的迁移能力，并能显著地激活初始型T细胞，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节［1-2］. DC是否成熟对其功能的发挥十分重要. 近年来研究表明, 细菌脂多糖（LPS）具有明确的诱导DC成熟并影响其功能的作用［3］，由此设想同样来自细菌含有CpG的DNA很可能对DC分化发育和功能有一定的影响. 我们利用我室提取的双歧杆菌基因组DNA (bifidobacteria DNA, B DNA)，观察了其对小鼠骨髓树突状细胞(bone marrowderived dendritic cell, BMDC)成熟的影响.
1材料和方法
1.1材料
小鼠重组GMCSF, IL4购自Promega 公司，LPS, 小牛胸腺DNA (Calf thymus DNA,CT DNA), DextranFITC购自Sigma公司，溶菌酶、限制性内切酶HpaⅡ购自中国医学科学院友谊公司，小鼠IL6, IL12(p40), TNFαELISA检测试剂盒购自R＆D公司，RPMI 1640完全培养基RPMI 1640（Hyclone公司）, 100 mL/L胎牛血清（Hyclone公司）组成，4℃保存备用；3HTdR购自Amersham公司，抗小鼠CD4(Gk1.5), CD8（2.43）, B220（RA3.3A1/6.1）, Iab(B212)单克隆抗体杂交瘤细胞株均购自ATCC，不同荧光素标记的大鼠抗小鼠单抗CD11cPE, CD40FITC, CD86PE, IabFITC及FITC或 PE标记的同型对照抗体均购自PharMingen公司，4℃保存. C57BL/6（H2Kb）小鼠60只，Balb/c（H2Kd）小鼠24只，6～8 wk，体质量18～20 g,雌性，上海必凯实验动物有限公司提供. 双歧杆菌菌株引自山东省卫生防疫站并通过细菌鉴定.
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