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低表达Cbfa1基因的人牙周膜细胞模型的建立及鉴定
   【摘要】  目的：构建针对核心结合因子a1（Cbfa1）的mU6小干扰RNA载体，并将其转染到人牙周膜细胞hPDLCs，观察其干扰效果，以期建立稳定的低表达Cbfa1基因的hPDLCs模型. 方法：设计针对Cbfa1基因编码区的寡核苷酸链，体外退火后克隆入经双酶切线性化的小干扰载体mU6中，对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定. 以脂质体法将mU6空载体和重组质粒分别导人hPDLCs细胞系. 用含G418的培养液筛选，挑取阳性克隆后用RTPCR技术检测各hPDLCs克隆内Cbfa1 mRNA水平的表达情况. 结果：经酶切鉴定及DNA测序，重组质粒Cbfa1siRNA中插入的目的基因片段与预计片段完全一致. G418筛选转染细胞4wk后获得稳定转染mU6空载体的细胞克隆株hPDLCsmU6和稳定转染重组质粒的细胞克隆株hPDLCssiRNA. 经RTPCR鉴定，Cbfa1在hPDLCssiRNA细胞中的表达比对照细胞明显降低. 结论：成功构建了针对Cbfa1的小干扰RNA载体，成功建立了稳定的低表达Cbfa1的hPDLCs模型，为进一步研究Cbfa1的功能奠定了实验基础.
 
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