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当前位置：教育论文中心首页--西医学--凋亡蛋白Daxx与TRAF3相互作用的筛选及相互作用位点的鉴定
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凋亡蛋白Daxx与TRAF3相互作用的筛选及相互作用位点的鉴定
                                 作者：张翠莉，成海恩，王应雄
   【摘要】  目的: 利用酵母双杂交技术在成人肝文库中筛选能与死亡结构域相关蛋白（Daxx）相互作用的蛋白，并用哺乳动物细胞中进行了免疫共沉淀验证，以进一步了解Daxx的功能. 方法: 利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增Daxx全长ORF，构建pDBLeuDaxx载体. 转化MaV203，检测细胞毒性和自激活作用，确定His基础表达的3AT浓度. 依次转化成人肝cDNA文库. 在营养缺陷型培养基上挑取三阳性克隆. 进行回转实验和免疫共沉淀验证，并利用βgal分析进行了相互作用结构域的鉴定. 结果: 筛库转化效率达到5.8×106个克隆. 筛选到了一株能与Daxx相互作用的阳性克隆，DNA序列分析和同源检索表明该阳性克隆为肿瘤坏死因子受体相关因子3（TRAF3）.通过回转及coIP证实了TRAF3能与Daxx相互作用，βgal分析发现TRAF3通过TRAF Domain与Daxx相互作用. 结论: TRAF3通过TRAF Domain与Daxx相互作用，可能参与了Daxx的调控和功能，为进一步了解Daxx作用的分子机制奠定了基础.
 
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