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人DDR2基因pShuttleCMV穿梭载体的构建及表达
                                  作者：任婷婷，刘新平，车红磊，张健，张璟，李霞，苏金
   【摘要】  目的：构建带有flag标签的人DDR2 pShuttleCMV载体， 检测其真核表达并观察DDR2分子的亚细胞分布. 方法：以含有人全长DDR2 cDNA的质粒为模板，用PCR方法扩增DDR2基因的C端（DDR2C），并在其C末端带上含24 bp的flag标签，Nco I/EcoR V酶切后亚克隆入含有DDR2全长序列的pMD18T载体，即替换掉原有DDR2序列的C端，引入flag标签，测序正确后再克隆入pShuttleCMV表达载体，酶切鉴定正确后采用脂质体法瞬时转染HEK293细胞，Western Blot检测DDR2flag在细胞中的表达. 瞬时转染Hela细胞，通过间接免疫荧光法观察DDR2分子在细胞内的分布情况. 结果：测序及酶切显示DDR2flag/pShuttleCMV载体构建符合预期；脂质体法转染HEK293细胞，24 h后用Western Blot方法检测到目的蛋白的表达；对转染了目的载体的细胞应用FITC标记的抗体进行间接免疫荧光实验，激光共聚焦显微镜观察到DDR2分子主要分布于细胞质与细胞膜. 结论：成功构建并表达了C末端带flag标签的DDR2真核表达载体，使其在真核细胞中表达，并观察到其亚细胞分布.
 
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