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兔大电导钙敏感性钾离子通道β亚基的克隆及生物信息学分析
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【西医学毕业小论文】 作者：张孝勇，崔光彬，杜滂，马克军，王亚蓉，韩苇，颜真，张英起，魏经国【摘要】 目的：克隆新西兰白兔大电导钙敏感性钾离子通道(BKCa)β亚基基因，观察其组织分布，并对其进行生物信息学分析. 方法：采用3′及5′cDNA末端快速扩增(RACE)及RTPCR技术从兔Oddi括约肌(SO)组织获得BKCa通道β亚基的全长cDNA序列. 并应用生物信息学方法分析该基因的同源性、蛋白结构域及跨膜拓扑结构. 结果：兔BKCa通道β亚基基因cDNA全长为1168 bp，开放读窗长度为576 bp，编码191个氨基酸. 生物信息学分析表明该基因核酸序列及氨基酸序列与人类及其它哺乳动物有很高的同源性；拓扑结构为两次跨膜蛋白，具有4个功能结构域，含有1个磷酸化位点及2个N糖基化位点. 结论：首次成功地从兔SO组织克隆出BKCa通道β亚基基因，获得新GenBank号 DQ821756，为进一步研究该基因的功能奠定了基础.
【关键词】 钙敏感性钾离子通道
0引言
大电导钙敏感性钾离子通道(large conductance Ca2+ sensitive K+ channels, BKCa)广泛分布于平滑肌细胞(SMC)，其主要生理作用是调节SMC膜电位和肌张力［1］. BKCa通道是由α亚基和β亚基共同组成，其中α亚基是结构亚基，构成孔道，表达量较恒定；β亚基是调节亚基，可提高通道对钙离子的敏感性，表达量的高低同该通道的功能状态密切相关［2］. 但目前GenBank尚未发布兔BKCa通道β亚基的基因序列，因此获得这段基因序列成为下一步研究的关键. 我们根据已知新西兰白兔部分组织BKCa通道β亚基保守区序列(GenBank Number: AB009313, AF107300, AY829265)设计引物，直接体外扩增兔Oddi括约肌(sphincter of Oddi, SO)细胞BKCa通道β亚基基因的cDNA全长序列，并采用生物信息学方法对该基因的特征进行分析.
1材料和方法 |
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