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苏云金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌亲缘关系研究

【西药学论文】【摘要】 目的 探讨苏云金芽孢杆菌(Bt)与蜡状芽孢杆菌(Bc)的亲缘关系,为Bt鉴定、安全性评价及降低其致病风险等提供科学依据。方法 采用肠杆菌基因间重复一致序列-PCR(ERIC-PCR)技术,对6株苏云金芽孢杆菌和3株蜡状芽孢杆菌及对照菌株的基因组DNA进行扩增,对其指纹图谱进行分析;回收并克隆重复性好的苏云金芽孢杆菌基因组DNA扩增片段,以其为探针,分别与供试菌株基因组DNA进行杂交。结果 与蜡状芽孢杆菌相比,苏云金芽孢杆菌菌株间基因组DNA指纹图谱较一致;所有供试苏云金芽孢杆菌菌株均扩增产生一条250bp左右的片段;苏云金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌均可扩增产生600bp左右的共有DNA片段。此外,以苏云金芽孢杆菌500bp片段为探针与苏云金芽孢杆菌基因组DNA杂交有很好的特异性。结论 肠杆菌基因间重复一致序列-PCR指纹图谱可以正确反映苏云金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌亲缘关系;500bp片段可以作为苏云金芽孢杆菌鉴定探针。
【关键词】 苏云金芽孢杆菌
苏云金芽孢杆菌 (Bacillus thuringiensis,Bt)与蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus,Bc)同属于蜡状芽孢杆菌菌群,为自然界中广泛分布的革兰阳性菌〔1〕。其中Bt在其休眠期可形成对昆虫有毒性的伴胞晶体。因此,被作为生物杀虫剂广泛应用于农业及卫生害虫的生物防治;Bc则是人畜条件致病菌,可导致人食物中毒和感染,引起呕吐和腹泻〔2〕。研究表明,在自然环境中,两者染色体体外遗传物质可以出现高度重组〔3〕,在DNA水平也具有较高的同源性,只有个别碱基有差异〔4〕。由于Bt与Bc的相似性,许多细菌分类学家认为Bt与Bc应为同一个种〔5〕。Bt和Bc间的同源性关系,使Bt安全性问题越来越受到人们重视。因此,为研究两者的亲缘关系,对Bt的鉴定、Bt应用的安全性评价,以及进一步提高Bt杀虫效力、降低其致病风险,本文利用肠杆菌基因间重复一致序列(ERIC)-PCR技术〔6〕对Bt和Bc全基因组DNA进行扩增,对获得的Bt和Bc基因组DNA指纹图谱
 
 
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