| | | 兔抗Cap43多克隆抗体制备和初步纯化
| | 医学检验论文【摘要】 目的医学检验论文 制备兔抗Cap43多克隆抗体。方法 以30个氨基酸组成的医学检验论文多肽为半抗原与钥孔血蓝蛋白(mcKLH)通过碳化二亚胺(EDC)法化学偶联成完全抗原(多肽-mcKLH)免疫家兔；制备兔抗Cap4443多克隆抗体；斑点ELISA法检测抗体效价，经辛酸-硫酸铵法初步纯化抗体后，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳考马斯亮蓝检测其纯化后的纯度。结果 经免疫11周得到兔抗Cap43多克隆体，抗体效价为1：500。结论 采用EDC化学偶联半抗原和大分子载体蛋白mcKLH，使其成为同时具有免疫原性与免疫反应性的完全抗原，用其免疫家兔获得多克隆抗体。
【关键词】 半抗原
流行病学和动物实验已证实，镍化合物可以致癌，以致肺癌为主。为进一步研究Cap43在镍所特异引起肺癌者体内组织及血清中的表达水平及其特点，本实验采用硫化二亚胺(EDC)连接多肽与大分子载体蛋白的方法，使其组成完全抗原，进而免家兔制备抗Cap43多克隆抗体，为研究镍所致肺癌提供依据。
1 材料与方法
11 材料 多肽由上海生工全自动合成仪合成；EDC试剂盒(美国Pierce公司)，完全及不完全福氏佐剂(美国Sigma公司)；HRP-羊抗兔和 DAB (北京中杉金桥生物技术公司)；硝纤维素膜(NC膜)，SephadexTMG-25 脱盐柱(Amersham Biosciences,Sweden),小牛血清，牛血清白蛋白(洛阳华美公司)；loading buffer(北京碧云天生物公司)；其他试均为国产分析纯；日本大耳兔平均体重15kg(本校动物实验中心)。
12 方法
121 Cap43特征性肽段的合成 由上海生工合成Cap43 C末端特征性的由10个氨基酸(TRSRSHTSEG)重复3次所组成的肽段。总质量为10mg，合成后期经HPLC纯化，纯度>95%。冷冻干燥4℃保存。
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