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总黄曲霉毒素ELISA定量检测试剂盒研制

【西药炮制论文】【摘要】 目的 研究并建立敏感、特异和快速的针对食品中总黄曲霉毒素的ELISA检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速定量检测试剂盒。方法 在生产抗总黄曲霉毒素单克隆抗体基础上,利用间接竞争ELISA方法,研制出食品中总黄曲霉毒素快速检测试剂盒,并对试剂盒的各项技术参数进行测定。结果 该试剂盒对黄曲霉毒素B+G标准品的最低检出浓度为026ng/ml,标准曲线的线性范围为026~2000ng/ml,线性方程y=-04463x+03532(R2=09915);对黄曲霉毒素B+G50%的抑制浓度为208ng/ml;试剂盒的条内变异系数为418%,条间变异系数为521%,抗体亲和力常数为152×10-10mol/L;对玉米3个加标水平的平均回收率分别为9863%,9456%和11205%;对花生的3个加标水平的平均回收率分别为8866%,8750%和8560%。试剂盒37℃可放置96h以上;试剂盒对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的交叉反应率分别为100%,575%,104%和19%,与其他真菌毒素无交叉反应。结论 研制出的ELIS试剂盒能定量检测食品中总黄曲霉毒素。
【关键词】 总黄曲霉毒素
黄曲霉毒素(Aflatoxin)是黄曲霉(XspeEillusflavus)和寄生曲霉(Aparasiticus)等产生的一组结构类似的次生代谢产物。据Gabal等〔1〕报道,有40%的黄曲霉菌株培养物可同时测出黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2(AFB1、AFB2、AFG1、AFG2)。同时黄曲霉毒素的毒性具有协同作用,因此,90%以上的国家都制定了食品中总黄曲霉毒素的限量标准。目前总黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层层析法、色谱法。我国执行的食品中总黄曲霉毒素B1+B2+G1+G2的国家标准测定方法是薄层色谱法和微柱筛选法,均为目测半定量法,最低检出浓度为5μg/kg〔2〕。这些方法因受本身的限制,精确度低、敏感性差;样品前处理过程复杂费时;或需要价格昂贵的仪器,检测成本高,难以推广应用,影
 
 
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