| | | 吉林省流行麻疹野病毒的核蛋白基因特征
| | 药学本科毕业论文【关键词】 麻疹
麻疹是由副粘病毒科麻疹病毒属的药学本科毕业论文麻疹病毒引起的药学本科毕业论文急性传染病〔1，2〕。研究发现，在麻疹病毒的6个结构基因中，除了血凝素蛋白(H)以外，核蛋白(N)的基因变化较大，其中N蛋白序列的羧基端450个核苷酸的区域属于高变区。为此，我们对麻疹病毒的核蛋白基因的分子生物学进行研究，为预测和控制麻疹的发生提供科学依据。
1 材料与方法
11 标本收集 2004年11月～2005年4月，在吉林省部分地区散发或暴发的麻疹疑似病例中采集标本，患者出疹3d内同时采集静脉血2ml(如有可能，出疹7～10d后再采集1份血)和咽拭子。咽拭子保存在2ml麻疹病毒标本运输液中(含有5%牛血清和终浓度含青霉素2000U/ml、链霉素200μl/ml和制霉菌素25U/ml的细胞培养液)。用于病毒分离的标本，-80℃保存。
12 病毒分离 将标本4℃过夜后取05ml接种于生长良好单层的CDW150细胞(又称Vero-SLAM细胞，具有麻疹病毒的细胞受体)，吸附60～120min后弃取上清，换含2%胎牛血清的胎牛血清培养液(DMEM)，培养7～10d，每天观察细胞培养液pH值和细胞病变(CPE)。必要时换液或盲传1代。细胞病变>75%时收获冻存。
13 病毒鉴定 用兔抗麻疹免疫血清对分离株作微量中和试验进行鉴定。兔抗麻疹免疫血清(长春生物制品研究所)。
14 麻疹IgM抗体测定 用酶联免疫吸附试验(ELISA)捕捉法检测病人血清中的麻疹IgM抗体，试剂盒(德国维润赛润生物试剂有限公司和北京贝尔生物工程公司)。
15 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、序列测定和基因分型 采用酚-氯仿抽提液法提取麻疹病毒悬液中的病毒核糖核酸。参照美国疾病预防控制中心引物〔3〕。每次试验用去离子水作为阴性对照，扩增后的产物经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。逆转录酶和TaqDNA聚合酶(美国Biolab公司)。扩增后的PCR产物经纯化后，送上海生工生物技术服务有限公司完成测序工作。调出GenBank里的22个基因型代表株N基因羧基端450个碱基对序列，用Bio-Edit软件对这些代表株和本研究所分离到的17个毒株的N基因的450个碱基序列进行对比分析，确定基因分型。
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