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polβ高表达与食管癌细胞耐药的相关性
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【关键词】 DNA聚合酶β; 转染;食管肿瘤;肿瘤细胞,培养的;抗药性,肿瘤;四甲基偶氮唑蓝 DNA聚合酶beta (polymerase beta gene,polβ)广泛存在于哺乳动物细胞核内,是一条Mr为39×103的单肽链小分子蛋白,由355个氨基酸组成,是目前已知的最小的DNA聚合酶. 在碱基切除修复,DNA复制,跨损伤合成中发挥重要作用,还与基因组不稳定性有关[1-4 ]. 近年来的研究表明在多种肿瘤组织及肿瘤细胞株内polβ mRNA的表达都明显增加[5-6]. polβ与肿瘤细胞耐药性的关系也逐渐引起人们的注意. 本实验通过研究人食管癌顺铂(concentration of cisplatin, cDDP)耐药细胞系Ec9706/cDDP和稳定高表达人野生型polβ的Ec9706细胞中polβ的表达水平及其对抗肿瘤药cDDP的敏感性,旨在进一步探讨polβ高表达与食管癌细胞耐药的相关性. 1材料和方法 1.1材料 人食管癌细胞株Ec9706由中国医学科学院肿瘤研究所提供;cDDP山东齐鲁药业股份有限公司产品;RPMI 1640培养液Gibco/ BRL公司生产;四甲基偶氮唑蓝(MTT)为美国Sigma产品;pEGFPC3 (Clonetech公司);野生型人polβ重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFPAC3(微生物学与免疫学教研室赵国强教授惠赠);G418(宝生物公司);6TG (美国Sigma公司);LipofectamineTM 2000(Invitrogen公司);引物2对,由上海生工公司合成:polβRNA检测引物:上游5′TGTTTGCCAGCTTCCC AGTA3′,下游5′CTCCA GTGACTCCCAAGGGA3′,扩增长度206 bp;βactin引物:上游5′TC AAGATCATTGCTCCTCCTGA3′,下游5′CTCGTCATACTCCTGCTT GCTG 3′,扩增长度113 bp.
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