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导向性IFNα2aαMSH基因的克隆、表达、纯化及鉴定
   【关键词】  干扰素α2a；α促黑素；大肠杆菌；基因表达；pET22b(+)载体
   　　IFNα2a是一种具有抗肿瘤活性的细胞因子，已被FDA批准用于多种恶性肿瘤的治疗，但因其在临床治疗中需大剂量长期给药且常会引发明显的毒副作用，使其应用受到一定的限制. αMSH是一种由多种细胞分泌的含13肽的激素，也是一种天然存在的多肽，目前的研究证实其可通过免疫调节作用抑制恶性黑色素瘤细胞的黏附、侵袭和转移［1-2］. Froidevanx等［3］研究表明所有黑素细胞和黑素瘤细胞都表达αMSH受体MC1R，且黑素瘤细胞表达MC1R上调，人黑素瘤细胞表面MC1R密度为900~5700结合位点/细胞，而正常状态下人表皮黑素细胞上MC1R不超过100个结合位点/细胞. 我们利用基因重组技术，构建导向性IFNα2aαMSH融合基因表达载体，并诱导其在大肠杆菌中表达，旨在为恶性黑色素瘤的靶向性治疗提供基础资料.
   　　1材料和方法
   　　1.1材料
   　　质粒pET22b(+)、菌种DH5α及RosettagamiTM2(DE3)，药学系生物技术中心保存；各种限制性内切酶，T4 DNA 连接酶以及DNA Marker DL2000（TaKaRa公司）；片段合成与序列测定由上海英骏生物技术有限公司完成；DNA凝胶回收试剂盒及质粒提取试剂盒（Omega公司）；低Mr蛋白标准（MBI公司）；鼠抗人干扰素α（Santa Cruz公司）；羊抗鼠IgGAp（华美工程公司）：显色剂（美国Promega公司）；蛋白胨、酵母粉、低熔点琼脂糖（Spanish公司）；异丙基硫代βD半乳糖苷（IPTG，华美生物工程公司）；其他试剂均为国产分析纯.
 
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