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融合蛋白HSP70EGFP的表达、纯化及其在树突状细胞内化抗原中的应用

【超声医学论文】【摘要】目的：研究树突状细胞（DCs）对热休克蛋白70（HSP70）融合蛋白的内化作用. 方法：首先原核表达并分离纯化HSP70和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的融合蛋白HSP70EGFP. 实验中所用DCs来源于人外周血. 内化实验分3组进行：将1，2组DCs分别与融合蛋白HSP70EGFP和蛋白EGFP孵育30 min；第3组先将DCs与HSP70孵育30 min，再与HSP70EGFP孵育30 min. 之后将3组DCs转至37℃ 孵箱内，培养0.5，1，2和24 h，应用流式细胞仪检测含HSP70EGFP或EGFP的DCs数量. 应用IL12 Elispot法检测HSP70EGFP等抗原促进DCs分泌IL12的效果. 结果： ① 成功获得了重组蛋白HSP70EGFP， Mr约为97 000，HSP70EGFP表达量占总蛋白的35.7%. 纯化后的融合蛋白HSP70EGFP溶液经紫外线灯照射时发出鲜绿色的荧光. ② 流式细胞仪检测结果显示在37℃ 孵育0.5 h后，HSP70EGFP孵育的DCs组阳性率为63.3%，其余两组为阴性. 在37℃ 孵育1，2和24 h后，3组阳性率均大于80.0%. IL12 Elispot检测结果显示，在刺激DCs活化及分泌IL12的水平上，HSP70EGFP与脂多糖（LPS）之间的差别无统计学意义(P>0.05)，而HSP70EGFP的活化DCs能力明显高于EGFP (P=0.001). 结论： ① 受体介导的吞噬作用在DCs内化HSP70EGFP的初始阶段起主要作用，随孵育时间的延续，吞饮作用占主要地位. ② HSP70EGFP可促进DCs分泌特征性细胞因子IL12.
【关键词】吞噬作用；受体介导；树突细胞；重组融合蛋白质类；热休克蛋白质70；绿色荧光蛋白质类
热休克蛋白家族在肿瘤免疫中发挥着免疫佐剂的功能，对开发肿瘤疫苗具有重要意义. 许多研究采用标记的热休克蛋白观察 HSP肽复合物在抗原递呈细胞（antig

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