| | | 诱骗寡核苷酸下调MKN45细胞OP18 基因表达及对细胞增殖的影响
| | 医学论文集【摘要】 目的医学论文集： 探讨转录因子E2F哑铃形诱骗寡核苷酸（Decoy ODNs）对MKN45细胞中op18基因转录调控的医学论文集影响及对细胞增殖的抑制作用．方法： 设计合成针对op18启动子上E2F的结合位点序列的哑铃形Decoy ODNs，然后将合成的序列进行退火、连接，使其形成哑铃形的结构，再应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将哑铃形Decoy ODNs转染MKN45细胞中．TRIzol 法提取细胞总RNA，用RTPCR方法检测细胞中op18 mRNA表达水平的变化．通过MTT实验监测细胞的生长增殖状况并绘制生长曲线，最后用TUNEL法观察细胞的凋亡的情况．结果： 哑铃形Decoy ODNs被成功转染MKN45细胞，并成功提取了细胞总RNA. RTPCR检测发现哑铃形Decoy ODNs转染后的MKN45细胞中op18 mRNA表达水平明显低于空白对照组，MTT实验所作的生长曲线显示转染细胞增殖速度与空白对照组相比较明显减慢，TUNEL凋亡染色可见凋亡细胞． 结论： 哑铃形Decoy ODNs能特异性抑制E2F转录因子对op18基因的转录调控，进而抑制op18基因表达及MKN45细胞增殖．
【关键词】 圈套寡核苷酸；转录因子；细胞增殖；基因疗法
E2F最初作为腺病毒（adenovirus, Ad）E2启动子的活化因子被发现［1］，它是细胞周期调控过程中起重要作用的转录因子，E2F调控异常存在于多种肿瘤细胞中［2］．靶向E2F转录因子是肿瘤基因治疗的策略之一．目前在治疗多种肿瘤的体内外动物实验中均取得了良好效果，包括非小细胞肺癌、胃癌及乳腺癌等［3-4］. op18（又称oncoprotein18, stathmin）是一种高度保守的细胞内蛋白，该蛋白在恶性肿瘤发生、发展及决定表型上具有重要作用及意义［5］． Polzin等［6］发现op18基因启动子上有E2F的结合位点，说明op18基因是转录因子E2F调控的靶基因，但截至目前E2F对op18基因的具体调控机制仍未阐明. 本实验应用诱骗寡核苷酸（decoy oligodeoxynucleotides, Decoy ODNs）策略来研究转录因子E2F对op18基因表达及肿瘤细胞的生物学行为影响，初步探讨E2F对op18基因的调控，旨在为肿瘤的生物治疗寻找新的技术方法．
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