| | | 用线性动力学方法表征L苯丙氨酸对兔小肠黏膜碱性磷酸酶的抑制作用
| | 西医学 免费毕业论文下载【摘要】 目的西医学 免费毕业论文下载：考察用线性动力学方法表征L苯丙氨酸对兔小肠黏膜碱性磷酸酶抑制作用的西医学 免费毕业论文下载可靠性. 方法：测定碱性磷酸酶水解对硝基苯酚磷酸酯（PNPP）的产物生成初速度. 用两个底物浓度下标定比活性计算米氏常数(Km)和最大反应速度(Vm), 再据二者对抑制剂浓度的响应确定抑制剂类型和抑制常数. 结果：双倒数分析法重复测定发现70％的Km和Vm随抑制剂浓度升高而同步下降，两动力学参数变化对应抑制常数的比值为(2.4±0.6, n=9). 线性动力学方法所得参数精度稍高，Km和Vm随抑制剂浓度升高同时下降的出现率约80％，两抑制常数之比为(2.0±0.8, n=10)，两参数变化对应的抑制常数及两抑制常数之比都与双倒数分析法一致. 如允许两抑制常数之比在2.5倍内波动，则两种方法都表明L苯丙氨酸为此碱性磷酸酶的反竞争性抑制剂. 结论：此线性动力学方法可用于表征反竞争性抑制剂.
【关键词】 L苯丙氨酸；反竞争性抑制；碱性磷酸酶；线性动力学方法；抑制常数
0引言
反竞争性抑制剂用作临床药物有明显优势［1-2］. 寻找反竞争性抑制剂需测定酶动力学参数（Km和Vm）对抑制剂浓度的响应以确定抑制类型及对应的抑制常数Kiv和Kik ［2-3］. 用双倒数分析法测定动力学参数寻找反竞争性抑制剂时需用从远低于Km到远高于Km范围内的底物浓度. 常规定量方法灵敏度有限，在很低底物浓度下测定初速度可靠性差，这限制了用常规定量方法和双倒数分析法筛选反竞争性抑制剂. 此前发现线性动力学方法只用高于Km的两个底物浓度也能表征竞争性抑制剂［4-5］. 用较高底物浓度有利于用常规方法定量测定初速度. L苯丙氨酸对大鼠小肠黏膜碱性磷酸酶为反竞争性抑制作用［6］. 我们以兔小肠黏膜碱性磷酸酶为模型，考察此线性动力学方法表征L苯丙氨酸对兔小肠黏膜碱性磷酸酶抑制作用的可靠性.
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