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大肠癌噬菌体抗体库的构建及抗CEA抗体的筛选

【西医学毕业小论文】作者:南清振,高蕾,张振书,杨希山,肖冰,姜泊【摘要】 目的 构建及初步鉴定大肠癌噬菌体抗体Fab呈现库,筛选人CEA单克隆抗体,并进行序列 分析 。 方法 分离大肠癌患者外周血淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,逆转录成cDNA。用PCR扩增人全套抗体基因片段,克隆于pComb3载体,再经电穿孔转化大肠杆菌XL1Blue菌株,形成噬菌体抗体库。以固相化CEA抗原淘筛抗体库,ELISA鉴定噬菌体抗体。其中一个阳性克隆进行测序。结果 逆转录PCR分别扩增出约680bp大小的κ、λ和Fd基因。PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接转化,成功地构建了人源性Fab抗体基因库,库容量达2.1×107,Fab基因重组率为50%。以单抗捕获的CEA抗原淘洗4轮,出现特异性富集,阳性克隆经直接ELISA和交叉反应ELISA实验证实具有良好的抗CEA抗原特异性。DNA测序表明该抗体重链属IgG亚类并含有一条IgL亚类的轻链。结论 成功构建了大肠癌患者 自然 致敏抗体Fab段噬菌体呈现库,从中获得可与CEA抗原结合的噬菌体抗体,由此为大肠癌早期诊断及基因 治疗 提供了一种新的思路和方法。
【关键词】 大肠肿瘤;噬菌体抗体库;Fab抗体;癌胚抗原
Abstract: Objective To construct the Fab phage display antibody library of colorectal cancer so as to screen carcinoembryonic antigen (CEA) phage antibody from the constructed phage display library.Methods The total cell RNA was extracted from a colorectal cancer patient's peripheral lymphocytes, and reversetranscribed into cDNA. These cDNA were ampli
 
 
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