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当前位置:教育论文中心首页--药学本科毕业论文--过氧亚硝基阴离子调控谷氨酸脱氢酶的催化功能
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过氧亚硝基阴离子调控谷氨酸脱氢酶的催化功能

【药学本科毕业论文】【摘要】 目的: 观察过氧亚硝基阴离子(ONOO-)对谷氨酸脱氢酶(GDH)的硝基化修饰及功能调控. 方法 : GDH与ONOO-体外反应,测定酶活性及别构调节效应,Western Blot检测GDH硝基化修饰;制备含“去硝基化酶”的脾脏蛋白,观察能否逆转ONOO-作用. 结果: 4~12 μmol/L ONOO-不 影响 GDH活性和二磷酸腺苷(ADP)别构激活作用,但使三磷酸鸟苷(GTP, 10 μmol/L)别构抑制作用由(49±4)%降低至(69±7)%和(75±3)%;36~108 μmol/L ONOO-使GDH活性由(0.81±0.05) kat/kg降低至(0.55±0.06)和(0.29±0.07) kat/kg,使GTP(10 μmol/L)别构抑制作用降低至(83±4)%和(95±7)%;324 μmol/L ONOO-使GDH完全失活. Western Blot检测到ONOO-使GDH发生硝基化修饰.脾脏蛋白可部分逆转上述作用. 结论: ONOO-可通过硝基化修饰调控GDH催化功能.
【关键词】 谷氨酸脱氢酶;过氧亚硝酸;酪氨酸硝基化修饰;别构调节
  0引言
谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH)催化L谷氨酸与α酮戊二酸相互转化,是联系氨基酸和糖代谢的枢纽. GDH在细胞内可能会发生酪氨酸硝基化修饰[1],但该修饰对酶催化功能的影响尚少见报道. 鉴于体内蛋白硝基化主要通过过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite, ONOO-)介导[2],同时GDH催化功能被别构激活剂二磷酸腺苷(adenosine 5′diphosphate, ADP)和抑制剂三磷酸鸟苷(guanosine 5′triphosphate, GTP)调节[3],本 研究 观察ONOO-对GDH催化活性和别构调节的影响.
1材料和方法
1.1材料牛肝脏GDH纯酶(Type I, ammonium sulfate suspension, ≥40 units/mg p
 
 
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