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耐亚胺培南的铜绿假单胞菌的研究

【药学论文】铜绿假单胞菌是一种临床上常见的 医院 内的条件致病菌,本 研究 通过对耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药 分析 ,了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药机制,以利于临床合理用药。现报道如下。
1 资料与 方法
1.1 资料
(1)菌株:收集自2005年1至12月本院VITEK-32仪检出的耐亚胺培南铜绿假单胞菌22株。铜绿假单胞菌标准菌株ATCC 27853一株;(2)药敏纸片:头孢塞肟、头孢曲松、头孢他定、亚胺培南;(3)OprD2基因扩增试剂盒:裂解液A、裂解液B、反应液、耐热酶、阳性模板;(4)其他:9.8%(EDTA·K2+NA2HPO4),无菌生理盐水,M-H平板,血平板等。
1.2 方法
(1)纸片扩散法初筛:将新分离的纯菌种配成0.5McFarland密涂于M-H琼脂平板(Φ70mm)10min后于平板中央贴上EDTA纸片,纸片分2组:1组为头孢塞肟、头孢曲松,在距离EDTA纸片1cm处对称分别贴上头孢塞肟和头孢曲松。另1组为头孢他定、亚胺培南,在距离EDTA纸片1cm处分别贴上头孢他定、亚胺培南。35℃培养24h后观察结果。结果判断:①出现协同现象可能为产金属酶;②不出现协同现象可能为膜通透障碍或既产金属酶又有膜通透障碍;(2)粗提酶(冻融裂解法)将新分离的纯菌种配成0.5McFarland,取50μl于肉汤中35℃培养增菌24h后取1ml于离心管(1.5ml)中,-80℃反复冻融数次,培养无菌生长后于4℃离心机,以10000转/min离心25min,取上清液后-80℃保存待用;(3)改良三维试验[1]: 将铜绿假单胞菌标准株ATCC27853配成0.5McFarland密涂于M-H平板(Φ90mm)待干后于平板中央贴上亚胺培南纸片,距纸片2mm处分别成180°打2个宽1mm、长2cm的槽(标明①②),在①加酶粗提液20μl、②加酶粗提液+EDTA(9:1)35℃培养24h后判断结果
结果判断:①有扩大生长、②抑菌圈光滑完整则为产金属酶;②有扩大生长、①抑菌圈光滑完整则为产金属酶以外
 
 
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