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甘氨酸对肾缺血再灌注损伤的保护作用及对iNOS表达的影响
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【西药学论文下载】【关键词】 肾缺血肾缺血再灌注损伤的病理机制非常复杂， 研究 资料表明，iNOS的过表达参与缺血再灌注损伤病理过程。本研究主要通过检测大鼠缺血后尿量变化、尿生化和肾功能，结合常规病理检查、电镜观察及免疫组化法测定iNOS蛋白表达变化，探讨甘氨酸对肾脏热缺血再灌注损伤的保护作用及作用机制。
1 资料与 方法
1.1 实验动物与试剂 健康雄性Wistar大鼠24只，体重(250±18)g，购自中科院上海实验动物中心。随机分为假手术组(A组)、对照组(B组)、甘氨酸 治疗 组(C组)。甘氨酸购自上海生物工程技术有限公司，iNOS免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程公司。
1.2 肾缺血再灌注动物模型的制作 2%戊巴比妥钠60mg/kg腹腔注射麻醉，大鼠仰卧位于恒温手术台上，左股静脉插管，接微泵输注生理盐水(A、B组)或甘氨酸溶液(C组)，速度1mL/(100g·h)。膀胱造瘘，接预先称重的1.5mL微量离心管，收集尿标本。 计算 尿量变化。输注液体60min后，行腹部正中切口，无损伤动脉夹阻断肾蒂30min。假手术组不上夹。于再灌注30、60、90、120min留取尿标本。2h后断尾取血0.5mL。再灌注至24h，取门静脉血3mL，切取双肾。HE(苏木素伊红)常规染色，光镜检查，按paller标准评分。电镜检查，免疫组化法检测iNOS表达水平。
1.3 指标观察 ①记录再灌注后30、60、90、120min的尿量；②日立全自动生化仪检测再灌注2、24h血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)浓度；③苏木精伊红染色后光学显微镜下观察其组织形态学变化；④透射电镜观察其超微结构变化；⑤免疫组化法(Envision二步法)检测iNOS的表达水平，iNOS阳性反应结果为胞浆及胞核中有棕黄色颗粒。高倍镜下(×400)每片随机取5个视野，每个视野计100细胞，计算阳性细胞数。阳性细胞数为0记作(-)，阳性细胞数<25%为(+)，25%-50%为()，50%-75%为()，>75%为()，并将反应强度依次
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