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重组人类精囊蛋白的制备及功能研究
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【药学系毕业论文】【摘要】 目的 制备重组精囊蛋白(semenogelin, Sg)， 研究 其对精子活动的 影响 。 方法 设计特异性的引物，用分子克隆技术从精囊cDNA文库中扩增精囊蛋白Sg，再将DNA插入质粒载体PET100，筛选序列正确的阳性克隆，转染BL21(DE3)大肠埃希菌，诱导表达重组人类Sg蛋白，用500 g/L Ni-NTA纯化重组蛋白，用正常人的通过上游法筛选出的活动精子行抑制 分析 ，研究重组Sg在4种不同浓度0，1 ng/μL、5 ng/μL、10 ng/μL下对精子活动的影响。结果 重组Sg在5 ng/μL、10 ng/μL浓度下明显抑制精子的运动(P<0.001)。结论 Sg分子明显抑制精子运动，精液液化过程中，必须清除Sg中具有抑制功能的片段，精子才能前向运动。
【关键词】 精子活动；前列腺特异性抗原；重组技术；精囊蛋白
射精后的人类精液自发性凝固成最初的胶冻状态，随后的精液液化过程中，前列腺来源的蛋白激酶分解精液中的抑制精子活动的凝固蛋白，从而释放精子的运动。引起精液凝固的蛋白质主要是来自精囊分泌的含量丰富的精囊蛋白(semenogelin, Sg)，Sg具有抑制精子活动的作用［1-2］，其相对分子质量为52 000，由精囊上皮细胞特异性分泌，在精囊中被蛋白C抑制剂(protein C inhibitor, PCI)保护，以防被其他蛋白酶分解。射精后，Sg与精子表面的附睾蛋白激酶抑制剂Eppin结合［3-4］，精液液化过程中，前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen, PSA)将Sg分子中的抑制片段水解成许多相对分子质量<10 000的小片段，精子才能开始活动。从精液中分离的许多Sg的水解片段具有各种各样的生物活性［5］，认识不同的Sg分解片段对精子的影响，对调控精子的获能及受孕极为重要，也可为进一步认识精液液化的分子机制提供重要帮助。本文利用分子克隆技术体外重组人类精囊蛋白Sg，研究其对精子运动活性的抑制。
1 材料与方法
1.1 实验材料 本实验
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