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伤寒沙门菌fljB∶∶lacZ变异株的制备

【药学大专毕业论文】【摘要】 目的: 为 研究 伤寒沙门菌z66鞭毛抗原编码基因fljB的表达调节机制,建立该fljB 基因的β-半乳糖苷酶基因(lacZ)插入变异株。 方法 : 采用自杀质粒介导的同源重组方法进行制备。设计加接KpnⅠ和SalⅠ的特异性引物,用PCR扩增获得fljB基因的上、下游同源性DNA片段,并与用KpnⅠ和SalⅠ酶切pSV-β-半乳糖苷酶载体(pSV-β-galactosidase vector)的片段定向连接,将连接片段克隆至自杀质粒pGMB151,再通过电击法将重组质粒转入伤寒沙门菌,在含X-Gal的蔗糖平板上筛选获得同源重组的变异株。结果: 经筛选获得阳性克隆,经PCR及序列 分析 证实,fljB基因中的763 bp被3 550 bp的lacZ片段替代。结论: 成功构建伤寒沙门菌flj∶∶lacZ突变株,为进一步研究fljB基因表达调节机制奠定了基础。
【关键词】 伤寒沙门菌; fljB基因; β-半乳糖苷酶基因; 基因融合
[Abstract] Objective: To study the mechanisms of expressional regulation of fljB∶z66, the fljB∶∶lacZ mutant strain of Salmonella enterica serovar Typhi was constructed. Methods: The mutant strain was prepared by the method of homologous recombination mediated by suicide plasmid. The special primers with KpnⅠ and SalⅠ sites respectively were designed, the upper- and down-stream homologous fragments of the fljB gene were amplified by PCR, a lacZ cas
 
 
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