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当前位置:教育论文中心首页--药学实习报告范文--食管癌细胞NGAL基因416~+84区段存在TPA反应元件
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食管癌细胞NGAL基因416~+84区段存在TPA反应元件

【药学实习报告范文】【摘要】 目的 本文旨在对NGAL基因启动子区及其附近是否存在TPA反应元件进行 研究 。 方法 (1) 采用PCR法从食管癌细胞中克隆NGAL基因5′侧翼区416~+84片段,然后分别插入质粒pGLB和pGLE, 构建pGLB416和 pGLE416荧光素酶报告基因表达载体; (2) 将pGLB416和 pGLE416分别同pRLTK共转染食管癌细胞EC109;(3) 用TPA刺激转染的EC109, 检测细胞相对荧光素酶活力,通过相对荧光素酶活力变化判定NGAL基因5′侧翼416~+84区是否存在TPA反应元件, 同时进行生物信息学 分析 。 结果 无论是pGLB416还是 pGLE416, 与pRLTK共转染食管癌细胞EC109后,用TPA刺激,与其相应的空载体相比,转染细胞荧光素酶活力均极显著升高(t检验,P<0.01),约分别升高46.82和46.41倍;而TPA刺激组与没有TPA刺激组相比,pGLB416和pGLE416转染EC109细胞荧光素酶活力分别显著升高了5.17倍和7.37倍 (t检验,P<0.01)。生物信息学分析显示,NGAL基因5′侧翼416~+84区段至少存在4个潜在的TPA反应元件。结论 食管癌细胞NGAL基因5′侧翼416~+84区段存在着TPA反应元件。
【关键词】 NGAL基因 食管癌细胞 基因表达调控 TPA反应元件
0 引言
NGAL(Neutrophil GelatinaseAssociated Lipocalin)基因是lipocalin家族的一个新成员,全长5 869bp,包括7个外显子,位于染色体9q34区域,单拷贝,蛋白编码区长度591bp,编码197个氨基酸。近年有研究证明,NGAL基因的蛋白产物具有保护调节基质金属蛋白酶9(Matrix Metalloproteinase9,MMP9)的活性,以及作为小分子铁化合物结合蛋白参与机体铁代谢和天然免疫反应等功能[13]。我们以往研究发现,在TPA(12otetra
 
 
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