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微阵列—比较基因组杂交技术及其在肿瘤研究中的应用
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【执业药师论文】【摘要】 微阵列比较基因组杂交(array-CGH) 技术是将DNA克隆或cDNAs做成微阵列，代替传统CGH法中中期染色体作为杂交靶，不仅使分辨率提高，甚至可以确定肿瘤相关基因并提供精确的定位。全文综述Array-CGH的原理、 方法 及其在肿瘤学中的 应用 和意义。
【关键词】 微阵列-比较基因组
微阵列比较基因组杂交(array-comparative genomic hybridization，Array-CGH)技术是将DNA 克隆或cDNAs做成微阵列，代替传统CGH检测中将中期染色体作为杂交靶进行检测，不仅使分辨率提高，而且还可以确定肿瘤相关基因并提供精确的定位。同时可经 计算 机软件识别每条染色体，克服了需要经验丰富的人员识别染色体的限制，为快速全面地 分析 肿瘤组织DNA 拷贝数的变化，以及染色体不稳定性的检测提供了较为理想的方法。本文就该技术原理、方法及其在肿瘤 研究 中的应用作一简单的综述。
1 微阵列—比较基因组杂交概述
1.1 Array-CGH基本原理
Array-CGH与CGH相似，但它是用DNA克隆或cDNAs微阵列代替中期染色体铺片作为杂交靶，即将等量的不同荧光标记的待测和参照DNA经人Cot-1DNA封闭非特异性重复序列后，同时杂交到由DNA克隆或cDNAs组成的微阵列上。用微阵列每个靶点上的两种信号的荧光比例反映待测基因组DNA在相应的序列或基因上的拷贝数变化[1～5]。
1.2 方 法
1.2.1 微阵列制备
微阵列可以为DNA克隆微阵列和cDNAs微阵列。DNA克隆是在BAC、PAC 或YAC载体中克隆的DNA片段。cDNAs 微阵列，可以从样本中提取总 RNA，再分离mRNA，然后将得到的cDNAs进行PCR扩增。用专门的仪器将 DNA克隆或cDNAs点样至覆盖特定介质的玻片上，按照在染色体中的分布，确定靶点的排列顺序。为了得到精确的结果,每个靶点可重复点样2～10次。点样后，立即将玻片在80℃烘烤10min，制成微阵列玻片
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