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鼠HMGB1蛋白的原核表达及分离纯化
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【中西医临床医学论文】作者:赵中夫 杨慧 刘明社 张芸 杨柳絮 封江南【关键词】 高迁移率族蛋白1;原核表达载体;纯化摘要 目的:克隆小鼠HMGB1基因,构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并分离纯化获得His- HMGB1的融合蛋白。 方法 :脂多糖刺激后的RAW264.7细胞,提取总RNA,经RT-PCR扩增出含HMGB1的目的片段,克隆于pMD-19T载体,再亚克隆至含有pelB引导肽及His-标签肽的高效表达载体pET-26b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后行SDS-PAGE鉴定目标蛋白表达,用镍鳌合琼脂糖凝胶亲和层析法分离纯化含His-标签肽的目的蛋白。结果:经PCR扩增出大小为648 bp的HMGB1基因片段,成功构建目标蛋白的融合表达载体,经诱导表达及分离纯化,获得了约30 kD的融合蛋白。结论:构建HMGB1的融合表达载体,获得分离纯化融合蛋白His- HMGB1,为进一步 研究 其生物学功能奠定了基础。 关键词 高迁移率族蛋白1;原核表达载体;纯化 Mouse HMGB1 Prokaryotic Expression and Purification Abstract Objective:To clone mouse High mobility group box 1 (HMGB1) gene and construct the prokaryotic expression vector,to induce and purify the expressed fusion protein HMGB1.Methods: The total RNA was extracted from mouse RAW264.7 cells stimulated by LPS.The sequence including the whole length of HMGB1 was amplified by RT-PCR and inserted into pMD-19T.The combinant vector
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