| | | 脊髓伤后脊髓组织一氧化氮合酶活性的动态变化及其意义
| | 临床医学毕业论文 一氧化氮(Nitric oxide, NO)是由一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase, NOS)催化左旋精氨酸(L-arginine, L-Arg)而产生，在生物体内具有广泛而多样的临床医学毕业论文生物学效应，在生理状态下能传递信使、调节血管张力；在病理状态下参与脑缺血损害，具有神经毒性作用[1]。然而它在脊髓损伤中的临床医学毕业论文作用尚不清楚。由于NO半衰期极短，难以直接测定,加之它在体内不能贮存，所以本实验通过测定大鼠脊髓压迫伤后NOS活性的动态变化来间接反应NO的变化规律，以利于进一步探讨NO与脊髓继发性损伤的关系。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组 健康、封闭群SD大鼠42只,体质量 (280±30)g，随机分为假手术组及根据后路压迫伤后取材的时间分为0、5、10、20、30和60min组，每组6只。
1.2 试剂及器材 L-[2,3,4,5-3H]-arginine、Dowex AG50w-X8、NADPH、钙调蛋白均购自Sigma公司,其余试剂为国产AR级。Megafuge1.0R低温离心机为日本产品，Beckman LS5000 CE液体闪烁仪为美国产品，CPS-1A超声波粉碎机为上海超声波仪器厂产品。
1.3 方法
1.3.1 动物模型的制备 动物用1%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉,取后正中切口，切除T 8～10椎板，暴露脊髓，按Nystrom方法[2]后路压迫脊髓(35.0g/10min)。假手术组仅行脊髓暴露而不致伤。
1.3.2 脊髓标本的采集 按分组时间要求处死动物后,立即浸入冰水中，取伤段脊髓或相应部位脊髓置于冰冷的HEPES缓冲液中 (20mmol/L，pH7.4)，匀浆，超声粉碎。立即置于4℃低温离心机中离心 (15000r/min×30min)。
1.3.3 [3H]Citrulline检测 将上述25ml上清液加于含有2mmol/L NADPH、0.5mmol/L CaCl2、10 g/L钙调蛋白的50mmol/L HEPES缓冲液中，pH为7.4。然后加入25ml[3H]L-arginine (25m ci/25 m l),置于24℃恒温水浴箱中30min。立即加入含有2mmol/LEDTA 的20mmol/L HEPES反应停止液中，过Dowex AG层析柱，于Beckman液闪仪中测定[3H]-citrulline的放射活性。
1.3．4 蛋白含量的测定 采用改良Lowry法[3]测定蛋白含量。
1.3.5 NOS活性表示 NOS活性表示为每分钟每毫克蛋白形成的[3H]-citrulline的量。创伤后各时相NOS活性以与假手术组相比而得的相对值表示。
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