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人白细胞介素-3突变体的构建及在大肠杆菌中表达的研究
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【西医学免费论文下载】王 燕 朱锡华 万 瑛 纪贤文 刘 昕中国图书分类号 R392.11 摘 要 目的：为了在大肠杆菌中高效表达hIL-3cDNA，获得hIL-3蛋白，拟对天然型hIL-3进行构建以获得新的突变体，同时进行了活性测定，以便深入了解hIL-3的结构与功能之间的关系。方法：利用PCR技术对天然型hIL-3 N末端第3位蛋氨酸(Met3)和C末端第17位蛋氨酸(Lys116)进行定点突变，获得突变体MhIL-3和MVhIL-3。结果：经Suger双脱氧法测序证实突变体 MhIL-3 cDNA,MVhIL-3 cDNA 的活性为6.9×104 U/ml，而天然型的是1.5×104 U/ml。天然型pSM53hNIL-3表达量占菌体总蛋白的7%，突变型pSM53MVhIL-3表达量占菌体总蛋白的16%。结论：人IL-3 cDNA可通过PCR技术进行定点突变，所获得的突变型pSM53 MVhIL-3活性比天然型pSM53hIL-3高3～4倍。 关键词 PCR定点突变 hIL-3 cDNA突变体 高水平表达 hIL-3突变体
PCR site-directed mutagenesis of human IL-3 cDNA in vitro human IL-3 by PCR site-directed mutagenesis study
WANG Yan, ZHU Xi-Hua①,WAN Ying et al.Third Military Medical College,Molecular Biology Department, Chongqing 630038.①Third Military Medical College,Molecular Immunology Department, Chongqing 630038
Abstract Objective: In order to obtain a high level express of human IL-3,we modified the huma
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