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道地药材五鹤续断基因组脱氧核糖核酸提取方法的改进
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【全科西医学论文】【摘要】 目的为研究道地药材五鹤续断的遗传多样性、种类鉴定和基因指纹图谱的构建等提供基本保证。方法以中药材五鹤续断药源植物的鲜嫩叶片为材料，采用CTAB法并加以改进从中提取出基因组脱氧核糖核酸(DNA)，并检测其提取效果。结果使用改进的CTAB法从鲜叶中提取五鹤续断的基因组DNA浓度较高，能满足PCR反应的要求。结论自行改进的CTAB法提取道地药材五鹤续断基因组DNA效果较好。
【关键词】 五鹤续断; 脱氧核糖核酸(DNA)提取; CTAB法; 改进
道地药材是传统中医药文化中的精品，是在特定产区的外界环境和产区内该物种的地方种群遗传性状等综合因素的作用下，形成的品质优、疗效佳的中药材[1]。道地药材与非道地药材是不同产区的生物品，药材品质存在差异，但两者的形态和组织构造差异往往不明显，难以运用传统方法准确鉴别药材道地性。随着分子生物学的发展，DNA分子鉴定技术及方法已广泛运用于中药材道地性与非道地性的鉴定[2]。而DNA的分离纯化是DNA分子鉴定等分子生物学操作中的重要步骤，同样也是药用植物分子诊断技术中的关键环节。由于中药材中含有的小分子次生物质，如萜类、黄酮、香豆素、有机酸、鞣质等含有酚羟基的化合物，氧化后易与DNA结合，引起DNA降解或抑制酶的活性;而广泛存在的多糖类由于与DNA同属大分子化合物，在一般提取过程中很难完全去除。因此有必要不断摸索并建立不同条件下简单、快捷、高纯度的中药材基因组DNA提取方法。本实验就是以道地药材五鹤续断的幼嫩叶片为试验材料，采用自行探索改良的CTAB法对五鹤续断基因组DNA进行了提取，得到了质量较高的五鹤续断基因组DNA，为应用于五鹤续断的遗传多样性、种质鉴定和基因指纹图谱的构建等分子水平的研究提供了基本保证，也为其他道地药材在分子生物学水平方面的研究提供了一定的参考资料。
1 材料与仪器
1.1 材料五鹤续断叶片均采自湖北省恩施土家族苗族自治州鹤峰县走马镇万寺坪道地药材五鹤续断GAP研究及种植基地，经湖北民族学院医学院中药教研室袁成玉副教授鉴定
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