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人endostatin、 K5及endostatinK5重组腺病毒载体的构建及其表达
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【免费医学论文网】作者:李慧瑾, 张伟锋, 王东阳, 李荣华, 齐宗利, 赵俊丽, 夏海滨【摘要】 目的: 人endostatin、 K5及endostatinK5基因克隆, 重组腺病毒载体的构建及其表达产物体外活性检测。方法: 采用PCR方法扩增基因, 通过酶切连接方法将3种基因片段克隆到腺病毒shuttle载体pAd5CMVH1H2MCS6His中; 用磷酸钙沉淀法分别将经Pac I酶切的表达人endostatin、 K5及endostatinK5的腺病毒shuttle载体与Pac I酶切的腺病毒骨架共转染HEK 293细胞; 用CsCl密度梯度离心法纯化制备病毒; 用重组腺病毒感染HeLa细胞并在不同时间点收获蛋白, Western blot检测24 h、 48 h和72 h的蛋白表达量; 通过MTT方法检测蛋白对ECV304生长抑制作用。结果: 成功制备表达人endostatin、 K5及endostatinK5重组腺病毒载体; Western blot可以检测到蛋白表达, 蛋白表达量随病毒感染HeLa细胞的时间延长而逐渐增高; 由重组腺病毒所表达的3种蛋白对ECV304细胞均有明显的生长抑制作用。结论: 由含有人endostatin、 K5及endostatinK5基因的重组腺病毒载体所表达的蛋白对ECV304生长具有明显的抑制作用。 【关键词】 endostatin; K5; 腺病毒载体; MTT检测; 肿瘤 [Abstract] AIM: To construct the recombinant adenoviral vectors expressing human endostatin, K5 and endostatinK5 gene respectively, and study their bioactivity in vitro. METHODS: Human endostatin, K5 and endostatin
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