|
鼠抗人cKit单克隆抗体的制备及其特性鉴定
|
|
【西医临床医学论文】作者:刘虹辰, 毛朝明, 苏晓瑜, 阮铮, 丁秋兰, 王学锋, 王鸿利, 奚晓东【摘要】 目的: 鼠抗人cKit单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定。方法: 利用PCR技术获得人cKit的胞外免疫球蛋白区编码序列, 并将其亚克隆至原核表达载体pQE30, 构建出重组表达质粒pQE30hKitD45。测序鉴定正确后转化M15, 经IPTG37℃诱导4 h后, SDSPAGE显示融合蛋白(表达产物)以包涵体形式存在。用镍柱对融合蛋白进行纯化, 将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合, 经流式细胞术(FCM)分析和多次克隆化培养, 筛选出特异分泌鼠抗人cKit分子mAb的杂交瘤细胞株。采用Western blot、 Ig亚型快速定性试纸法、 FCM等对mAb的生物学特性进行鉴定。结果: 成功表达及纯化了人cKit重组蛋白, 并获得1株持续、 稳定分泌鼠抗人cKit mAb的杂交瘤细胞株, 命名为SRJ1。ELISA和Western blot、 FCM结果显示了该株mAb 能够识别Kasumi白血病细胞株表面表达的天然的cKit分子, 并与人正常外周血细胞无交叉反应。值得注意的是, Kasumi细胞含有一个不被SRJ1识别的亚群, 虽然其表达cKit(Ab81 mAb的结合正常)。结论: 成功构建了原核表达载体pQE30Kit45, 并获得高纯度的人pQE30Kit45重组蛋白; 成功制备了1株特异性的鼠抗人cKit mAb杂交瘤。其所分泌的抗体能特异地识别人cKit分子, 并且可能成为区分细胞表面表达不同cKit分子的潜在检测工具。 【关键词】 cKit; 原核重组蛋白; 杂交瘤; 单克隆抗体; 白血病 [Abstract] AIM: To prepare anticKit monoclonal antibodies and characterize their specificity of epit
|
|
|