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重组人白介素18在毕赤酵母中的高效分泌表达
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【药学毕业论文】作者：杨莉莉, 魏 枫, 刘 虹, 李 慧, 于津浦, 任秀宝【摘要】 目的: 构建人白介素18（hIL18）真核表达载体, 在毕赤酵母中高效分泌表达hIL18。方法: 通过PCR法扩增得到hIL18基因, 构建其真核表达载体pPICZaC/hIL18, 电转化毕氏酵母X33, PCR、 SDSPAGE、 Western blot等方法筛选获得高效表达rhIL18的工程菌株, 疏水层析和阴离子交换层析纯化表达产物, 并初步测定其生物学活性。结果: rhIL18经甲醇诱导后其表达产量约为202 mg/L。Western blot检测了rhIL18的特异性结合活性; rhIl18纯化后纯度达95%左右, 并证明rhIL18能够协同IL2诱导PBMC分泌IFNγ。结论: 构建了重组hIL18的基因工程菌, 并在毕赤酵母中实现了高效分泌表达, 为进一步研究其活性和功能奠定了基础。
【关键词】 人白细胞介素18; 毕赤酵母; 表达; 纯化
白细胞介素18 (IL18)/又称IFNγ诱导因子 (IGIF), 主要由巨噬细胞产生的细胞因子［1］。人IL18前体蛋白由193个氨基酸组成, 天然IL18的活化依赖于IL1转化酶（Interleukin1 conversing enzyme, ICE）的特异裂解作用, 从前体IL18的N端切除36个氨基酸残基而使之活化［2］ 。IL18的生物学活性与IL12相似, 能促进T细胞增殖, 诱导T细胞分泌IFNγ、 GMCSF, 抑制IL4和IL10产生, 增强NK及Th1细胞的细胞毒活性等; IL18的表达还与自身免疫病、 肿瘤及感染有关［3, 4］, IL18在抗肿瘤及抗病毒等方面具有潜在的应用前景［5, 6］。目前关于IL18制备的报道主要集中在原核表达体系［2, 7］, 但由于原核表达体系产量较低, 且存在复性得率低等一些问题, 使得其生产成本较高。为了更好的研究hIL18特性, 探
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