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广寄生和红花寄生及其寄主植物与黄酮含量的相关性研究
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【药学个人简历范文】作者：李永华， 陈士林，卢栋，朱开昕，赵明惠【摘要】 目的考察广寄生与红花寄生及其寄主植物的总黄酮含量的关系。方法采用分光光度法测定寄生在4种不同寄主植物上的广寄生与红花寄生的总黄酮含量，并用正交实验的方法研究比较了不同提取条件对广寄生样品总黄酮提取率的影响。结果广寄生茎枝的总黄酮含量为5.24～5.56 mg/g，广寄生叶的总黄酮含量为27.14～32.08 mg/g;红花寄生茎枝的总黄酮含量为3.70～5.00 mg/g，红花寄生叶的总黄酮含量为33.87～35.00 mg/g。正交实验结果优选的提取条件茎枝是A1B2C2D3，即广寄生茎枝0.5 g，乙醇浓度为60%，超声提取时间为30 min,超声提取温度为45℃，料液比1∶25;叶是A2B1C2D3,即广寄生叶0.5 g，乙醇浓度为70%，超声提取时间为20 min,超声提取温度为45℃，料液比1∶25。结论无论是广寄生还是红花寄生叶的总黄酮含量高于茎枝的总黄酮含量，寄生在同一寄主植物上广寄生茎枝的总黄酮含量要比红花寄生茎枝的总黄酮含量高，而红花寄生叶的总黄酮含量要比广寄生叶的总黄酮含量高。优选的提取方法稳定、可靠、简捷，提取效率高。
【关键词】 桑寄生; 广寄生; 红花寄生; 寄主; 总黄酮
桑寄生是中国传统常用中药材，《中国药典》桑寄生药材为桑寄生科钝果寄生属广寄生Taxillus chinensis (DC.) Danser的干燥带叶茎枝[1]，但由于桑寄生沿用历史的原因，目前桑寄生药材原植物来源依然十分复杂，除了广寄生外，至少还包括有桑寄生Taxillus sutchuenensi (Lecomte)Danser、红花寄生Scurrula parasitica L.、毛叶钝果寄生Taxillus nigrans (Hance)Danser 、柳叶钝果寄生Taxillus delavayi( Van Tiegh.)Danser等，在药材流通与使用上都作桑寄生使用[2]。不同寄主植物的同一种桑寄生药材化学成分含量已见文献报道[3]，而生长于相同寄主植物的不同桑寄生药材品种的化学成分含量及其含量的差异性研究目前尚未见报道。本文通过对来自相同寄主植物上广寄生和红花寄生总黄酮含量进行检测与比对分析，考察桑寄生品种及其寄主植物与桑寄生总黄酮含量的关系，为桑寄生药材的科学使用提供理论依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器与试剂岛津UV- 265FW 分光光度计;KQ-2200E 超声波清洗仪(江苏昆山超声仪器有限公司);芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为100080- 200306);所用试剂均为分析纯。
1.2 药材桑寄生药材样品分别采自广西南宁、钦州等地，经广西中医学院邓家刚教授鉴定分别为广寄生Taxillus chinensis (DC.) Danser和红花寄生Scurrula parasitica L.，寄主植物分别为桑树Morus alba L.、板栗Castanea mollissima Blume、夹竹桃Nerium indicum Mill、梅Prunus mume (Sieb.) Sieb.et Zucc.等，将采集桑寄生药材样品清洗干燥茎叶分开粉碎(60目)后备用。
2 方法与结果
2.1 显色方法与检测波长确定 参考有关文献采用三氯化铝比色法进行测定[4，5]。以一定浓度的乙醇为溶剂，以三氯化铝为显色剂，对对照品溶液与样品溶液依法显色后，按紫外-可见分光光度法(《中国药典》2005年版Ⅰ部附录)在200～600 nm波长范围内扫描，测得对照品与样品的最大吸收波长为408nm左右。
2.2 标准曲线的制备精确称取105℃干燥至恒重的芦丁对照品5.03 mg，置10 ml 容量瓶中，加少量60%乙醇溶解后定容至刻度。精确吸取5 ml于10 ml 容量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，制成0.25 mg/ml的标准液。精确吸取标准液0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml，加60%乙醇稀释至1.0 ml，加0.1 mol/L的三氯化铝溶液2 ml，0.1 M的醋酸钠溶液1 ml，摇匀，室温放置20 min，在波长408 nm测吸收度。以吸收度A对浓度C作标准曲线，回归方程为A=0.246 6C-0.004 4，r为0.999 8，表明在0.006 3～0.063 mg/ml 之间呈良好的线性关系。
2.3 总黄酮提取工艺设计 采用广寄生样品进行正交实验，选择乙醇浓度(A)、提取时间(B)、提取温度(C)、料液比(D)为实验因素。因素水平见表1，实验结果见表2。表1 提取工艺参数设计
2.4 稳定性实验 精确吸取样品溶液2 ml，依法显色20 min后至100 min内，在波长408 nm，每隔10 min 测定一次吸收度。结果表明：显色后室温放置20～100 min内，其吸收度稳定，RSD为1.89%。
2.5 精密度实验精确吸取样品溶液2 ml，依法显色20 min后，在波长41 nm，重复测定6次，RSD为0.66%，表明仪器的精密度好。表2 L9(43)提取工艺条件正交试验结果
2.6 重复性实验精确吸取6份芦丁标准溶液各1.0 ml，依法显色后，测定吸收度，RSD为1.37%，表明本方法的重复性好。
2.7 加样回收率实验 精确称取已知含量的样品0.5g，5份，分别加入一定量的芦丁对照品，依法测定含量，计算回收率。结果见表3。表3 加样回收率实验结果
2.8 样品制备与测定 分别称取不同寄主的广寄生和红花寄生茎枝、叶各0.5 g，按照茎枝、叶的最佳提取条件进行提取，每个样品提取2次，每次乙醇用量为12.5 ml，离心分离，合并提取液，提取液用石油醚萃取3次除去其它色素，用相同浓度的乙醇定容至25 ml。精密吸取样品液0.5 ml,依法显色测吸收度用标准曲线计算样品总黄酮含量，每个样品重复3次试验，取平均值。结果见表4。表4 同一寄主植物上的广寄生与红花寄生的总黄酮含量比较
3 讨论
试验结果表明，4种不同寄主植物无论是广寄生还是红花寄生其总黄酮含量均表现出一定的差异性，广寄生茎枝总黄酮含量为5.24～5.56 mg/g，叶总黄酮含量为27.14～32.08 mg/g;红花寄生茎枝的总黄酮含量为3.70～5.00 mg/g，红花寄生叶的总黄酮含量为33.87～35.00 mg/g。总体看叶的总黄酮含量比茎枝的总黄酮含量要高，其中广寄生叶的总黄酮含量比其茎枝高出4倍以上，红花寄生叶总黄酮含量比其茎枝高出7倍以上。因此在入药时，需注意药材的茎和叶一起入药，此点与药典中对桑寄生的定义为“带叶茎枝”相符。
寄生在同一寄主植物上，广寄生茎枝的总黄酮含量要比红花寄生茎枝的总黄酮含量高，而红花寄生叶的总黄酮含量要比广寄生叶的总黄酮含量高。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005:210.
[2] 龚祝南,王铮涛,徐珞珊,等.中国桑寄生科Loranthaceae药用植物研究[J].中国野生植物资源,1996,(1):11.
[3] 李永华,陈士林,卢 栋,等.不同寄主植物桑寄生总黄酮含量研究[J].时珍国医国药,2009,20(12):3009.
[4] 马陶陶,张群林,李 俊,等.三氯化铝比色法测定中药总黄酮方法的探讨[J].时珍国医国药,2008,19(1):54.
[5] 何书美,刘敬兰.茶叶中总黄酮含量测定方法的研究[J].分析化学简报,2007,35(9):1365.
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