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兔胸腺HMGN2的分离纯化鉴定
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【综合类别 免费小论文】【摘要】 目的：分离纯化鉴定兔高迁移率非组蛋白N2(High mobility group chromosomal protein N2, HMGN2)。方法：利用液氮研磨和5%高氯酸从新鲜兔胸腺组织获得酸溶性萃取物，经反相高效液相色谱（RPHPLC）分离得到HMGN2，经过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westernblotting对HMGN2进行分子量测定和特异性鉴定。并利用琼脂糖弥散抑菌实验对其杀菌活性进行鉴定。结果：利用上述方法分离纯化出高纯度的兔HMGN2。对大肠埃希菌临床分离株54080、大肠埃希菌ATCC25922有明显杀菌活性。结论：建立简单分离高纯度的HMGN2的方法。
【关键词】 兔胸腺；HMGN2；分离
高迁移率非组蛋白(High mobility group chromosomal protein, HMG)是脊椎动物和非脊椎动物的细胞核中含量最为丰富的非组蛋白家族[9]，这一家族的成员普遍存在于高等真核生物中，目前HMG蛋白分为三个亚家族，分别为HMGA、HMGB和HMGN。HMGN2为HMGN亚家族的成员，其基因位于染色体1q35,相对分子质量为9.2KD，共由90个氨基酸组成。已有研究表明，HMGN2结合于染色体的特异部位，是染色体纤维构成必不可少的部分[2,3]，参与DNA的复制和转录[1]，与转录活性基因有关[5]，能解开致密染色体的折叠结构从而有利于复制和转录的启动[6]。本实验室首次发现HMGN2具有明显的抗菌活性[4]。为了进一步研究HMGN2的生物学功能，我们利用琼脂糖弥散抗菌法鉴定内源性抗菌肽的方法，分离纯化兔胸腺HMGN2。
1 材料和方法
1.1实验材料
主要材料:兔胸腺，致病性大肠埃希菌临床分离株54080、大肠埃希菌ATCC25922。主要试剂:丙烯酰胺，甲叉双丙烯酰胺，TEMED，蛋白质Marker为Merck产品；Tris、Tricine、琼脂糖、大豆培养基、三氟乙酸、溶菌酶、牛血清白蛋白（BSA）为Simga
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