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棕榈叶中黄酮类化合物的提取工艺研究
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【西药学本科毕业论文】作者：王觐，薛长勇，刘英华，张荣欣，张永，张月红，郑子新【摘要】 目的 研究棕榈叶中黄酮类化合物的提取条件。方法将棕榈叶严格控制在一定温度和pH值条件下，浸提浓缩测吸光度。结果以70%乙醇溶液浸取棕榈叶，提取温度为65℃，固液比为1∶30，提取时间为2 h，提取率最高。结论 棕榈叶中黄酮类化合物的最佳提取条件为：提取温度65℃，提取时间2 h，固液比1∶30。
【关键词】 棕榈叶；黄酮类化合物；提取工艺
棕榈为热带及亚热带树种，产地分布在印尼、马来西亚和南非等国，我国秦岭以南、长江中下游地区及华南沿海均有栽培。棕榈中富含黄酮类化合物，而生物类黄酮类化合物具有抗氧化、延缓衰老、防癌抗癌、抗炎症反应以及增强机体免疫力等多种生物活性［1］，在原产地大量棕榈叶都作为废弃物而未被合理利用。棕榈叶中黄酮类化合物的提取直接决定着其药用价值。文章对影响浸取的主要因素进行研究。
1 器材
无水乙醇、芦丁、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等均为分析纯国产试剂。棕榈叶由马来西亚灵芝仙公司提供。
日本岛津UV-120-02紫外分光光度计，回流冷凝器，Sartorius BS124s电子分析天平，常用电子天平，电热恒温水浴加热锅，植物粉碎机，恒温鼓风干燥箱，pH计等。
2 方法
定量称取棕榈叶置于回流冷凝装置中，加入浸提剂乙醇，严格控制在一定地温度和pH值条件下，浸取3次，3 h/次，将浸取液合并后抽滤浓缩，并置于冷冻干燥机中制成粉末状。配取定量试液和不同浓度的芦丁溶液分别同步做与硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等的显色反应，然后以芦丁作为标准溶液，用分光光度计在510 nm处测定吸光度，计算浸取液中总黄酮类化合物的含量及浸取率。
3 结果与分析
黄酮类化合物在花、叶、果等组织中，一般多以苷的形式存在，而在木部坚硬组织中，则多为游离苷元形式存在。黄酮苷类以及极性稍大的苷元（如羟基黄酮、双黄酮、橙酮、查耳酮等），一般可用丙酮、醋酸乙酯、乙醇、水或某些极性较大的混和溶剂进行提取［2］。极性溶剂中，乙醇的使用安全性高，价格较低，可回收利用，故本研究选定乙醇－水作为提取溶剂。分别考察了乙醇浓度、提取温度、料液比、提取时间等因素对浸取率的影响。
3.1 浸提剂乙醇质量分数的确定
考虑到温度过高会使黄酮类化合物氧化，过低会降低提取率，故在确定提取剂质量分数时，初步选取在55℃，65℃下进行实验。称取5份（5 g）棕榈叶粉置于具塞试管中，分别加入体积分数为20%，40%，60%，80%，90%的乙醇各15 ml，在55℃，65℃恒温水浴锅中提取2 h，过滤后分别取1ml提取液，用同浓度的提取液定容至25 ml，分别取出0.2 ml，采用NaNO2-Al(NO3)3 -NaOH 显色法，进行显色反应，然后以芦丁作为标准液，用分光光度计在510 nm处测定吸光度，进行分析，结果如图1所示。
由图1可知：随着乙醇浓度的提高，黄酮类物质提取量也随之增加，在乙醇浓度为70%处提取量出现峰值，当乙醇浓度大于70%，提取量减少，故本实验采用质量分数70%的乙醇作为提取剂。
3.2 最佳提取条件的确定根据棕榈叶提取率的主要影响
因素：固液比，提取温度，提取时间，笔者设计了3因素3水平的正交实验来确定最佳提取条件，其因素水平设置（见表1）。实验方法如下：称取棕榈叶10 g于回流冷凝装置中，用质量分数70%乙醇在所选取的条件下提取2次，3 h/次，合并两次滤液后浓缩，定容，移取一定量定容后的试样进行显色反应并用分光光度计分析，计算提取率，实验结果与分析结果见表2～3。表1 正交实验因素及水平（略）表2 正交实验结果分析（略）表3 方差分析（略）
正交实验结果表明，以70%乙醇溶液浸取棕榈叶时，最佳提取条件为A2B3C2。即提取温度为65℃，固液比为1∶30，提取时间2 h。由表2可知，RA>RB>RC,提取温度之间存在的差异相对显著，随提取温度的升高，提取率有所降低，则说明若温度过高，黄酮类化合物的结构可能会受到破坏，造成活性成分分解。
4 结论
通过以上实验结果确定，用70%乙醇提取棕榈叶中黄酮类化合物的最佳提取工艺条件为：提取温度65℃，固液比1∶30，提取时间2h。
【参考文献】
［1］覃仁辉，张梦军，吴世容，等.银杏中黄酮类化合物的提取及其医药学应用［J］.长沙大学学报，2004，18（2）：37.
［2］姚新生.天然药物化学［M］.北京：人民卫生出版社，2001：178.
［3］国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2000：564.
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